[發(fā)明專利]磷酸酯化龍眼肉多糖及其合成方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210305405.7
• 申請(qǐng)日: 2012-08-24
• 公開（公告）號(hào): CN102775513A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李雪華;寧苑靈;蔣潔;肖慶;何舟;蒙法艷;唐小麗;黃燕軍;李福森;魏涌標(biāo)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): C08B37/00
• 分類號(hào): C08B37/00;C12S3/02
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 45104
• 代理人: 黃永校

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種磷酸酯化龍眼肉多糖及其合成方法。?

背景技術(shù)

糖基磷酸酯類化合物，特別是葡萄糖基磷酸酯類化合物的合成及其生物活性的研究早有報(bào)道。研究表明多糖的磷酸酯類衍生物具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌和免疫調(diào)節(jié)劑等生物活性。果糖、葡萄糖等單糖本身不具有抗腫瘤、抗病毒等生物活性，但對(duì)其磷酯化后就具有這些活性。Hayachi等發(fā)現(xiàn)葡萄糖基磷酸酯衍生物具有抗腫瘤、抗病毒等生物活性，并作為藥物而應(yīng)用于臨床。磷酸果糖可用于治療重型腦梗死、拮抗慶大霉素腎毒性以及用于輔助治療心律失常等。陳茹玉等合成的N,N-二(2-氯乙基)果糖基磷酰胺酯的抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該類化合物對(duì)L1210細(xì)胞和S-180腹水癌有一定的抑制作用。?

在糖基上引入磷酸根，可使一些本無(wú)活性的糖類化合物具有了活性，并能提高某些多糖、寡糖的生物活性。因此就很有必要研究各種寡糖、多糖及其類似物的磷酸酯的生理功能，以期能夠找到磷?；螽a(chǎn)物的生理功能的一些規(guī)律，研究磷酸基團(tuán)在生理功能中的作用，為設(shè)計(jì)生理活性更好的磷酸酯衍生物提供參考數(shù)據(jù)。?

由于從自然界分離得到的寡糖或多糖的磷酸酯數(shù)量有限，種類也不多，影響對(duì)糖的磷酸酯的生物活性及磷酸酯在生物體內(nèi)的作用進(jìn)行系統(tǒng)的研究，為了深入研究糖的磷酸酯衍生物，轉(zhuǎn)向了人工合成。但用人工合成磷酸酯化龍眼肉多糖的方法尚未見有報(bào)道。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種磷酸酯化龍眼肉多糖及其合成方法，它能夠用人工合成的方法制備磷酸酯化龍眼肉多糖。?

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案達(dá)到上述目的：一種磷酸酯化龍眼肉多糖，該多糖由葡萄糖，阿拉伯糖，半乳糖醛酸、果糖和山梨糖組成，磷酸酯化龍眼肉多糖的分子量為112518.5。?

該多糖的結(jié)構(gòu)片段為：?

所述的磷酸酯化龍眼肉多糖的合成方法，包括如下步驟：?

（1）龍眼肉多糖分離提取?

將龍眼干果剝殼去核，按質(zhì)量體積比為龍眼肉：蒸餾水=1：4，采用熱水提取，控制溫度在90℃下提取4小時(shí)，過濾，濾渣重復(fù)提取3次，合并濾液，65℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，待提取液濃縮至粘稠狀，趁熱緩慢倒入4倍于其體積的95%乙醇中，密封靜置，醇沉物為龍眼肉粗多糖，?

（2）除蛋白及色素?

稱取一定量的龍眼肉粗多糖用蒸餾水配制成5.00g/ml溶液，往溶液中加入木瓜蛋白酶，使其終濃度為1g/ml，然后置于50℃恒溫水浴鍋中保溫3h，最后于100℃滅酶5min，4000r/min離心15min，去掉沉淀物，合并上清液，即得去除蛋白多糖溶液，將已去除蛋白的粗龍眼肉多糖配成5.00g/ml的水溶液，滴加30%H₂O₂去除色素，用量為多糖溶液體積的15.00%，用0.10mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)多糖液的pH值為8.0，于45℃水浴中反應(yīng)，每隔30min檢測(cè)一次pH值，確保反應(yīng)過程中反應(yīng)液的pH值維持在8.0，4h后終止反應(yīng)，冷至室溫，用0.10mol/L鹽酸調(diào)回中性，加入氯化鈉，使其濃度為5.00g/ml，然后緩慢加入無(wú)水乙醇，使其含量達(dá)35～40%，在冰箱中4℃放置過夜，次日離心收集沉淀，經(jīng)無(wú)水乙醇、丙酮反復(fù)洗滌后，45℃減壓干燥，得到去除蛋白及色素后的龍眼肉粗多糖，?

（3）去除蛋白及色素后的龍眼肉粗多糖二乙胺基乙基纖維素柱分級(jí)純化?

二乙胺基乙基纖維素作為柱填料，柱參數(shù)為：Φ2.5cm×40cm，分別用雙餾水、0.125mol/L的NaCl、0.30mol/L的NaOH溶液作為洗脫液進(jìn)行洗脫，控制流速6s/滴，每10ml收集一管，用改良的苯酚-硫酸法跟蹤檢測(cè)，合并正態(tài)峰的收集液，50℃減壓濃縮，濃縮液透析48小時(shí)后再濃縮、干燥，得到氯化鈉餾分的龍眼肉多糖，?

（4）氯化鈉流分的龍眼肉多糖丙烯葡聚糖凝膠S-300HR柱純化?

取氯化鈉流分的龍眼肉多糖，用Φ2.0cm×40cm的丙烯葡聚糖凝膠S-300HR柱作進(jìn)一步純化，洗脫液為蒸餾水，洗脫條件為1滴/4s，洗脫流分分別進(jìn)行減壓濃縮后進(jìn)行醇沉，離心，沉淀?真空干燥，取第一個(gè)洗脫流分干燥后的多糖，命名為龍眼肉多糖A，并用龍眼肉多糖A進(jìn)行磷酸酯化，?

（5）磷酸酯化龍眼肉多糖的合成?