[發(fā)明專利]磷酸酯化龍眼肉多糖及其合成方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210305405.7
• 申請日: 2012-08-24
• 公開（公告）號(hào): CN102775513A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李雪華;寧苑靈;蔣潔;肖慶;何舟;蒙法艷;唐小麗;黃燕軍;李福森;魏涌標(biāo)
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): C08B37/00
• 分類號(hào): C08B37/00;C12S3/02
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 45104
• 代理人: 黃永校

1.一種磷酸酯化龍眼肉多糖，其特征在于，該多糖由葡萄糖，阿拉伯糖，半乳糖醛酸、果糖和山梨糖組成，磷酸酯化龍眼肉多糖的分子量為112518.5。

2.一種磷酸酯化龍眼肉多糖，其特征在于，該多糖的結(jié)構(gòu)片段為：

3.如權(quán)利要求1所述的磷酸酯化龍眼肉多糖的合成方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）龍眼肉多糖分離提取

將龍眼干果剝殼去核，按質(zhì)量體積比為龍眼肉：蒸餾水=1：4，采用熱水提取，控制溫度在90℃下提取4小時(shí)，過濾，濾渣重復(fù)提取3次，合并濾液，65℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮，待提取液濃縮至粘稠狀，趁熱緩慢倒入4倍于其體積的95%乙醇中，密封靜置，醇沉物為龍眼肉粗多糖，

（2）除蛋白及色素

稱取一定量的龍眼肉粗多糖用蒸餾水配制成5.00g/ml溶液，往溶液中加入木瓜蛋白酶，使其終濃度為1g/ml，然后置于50℃恒溫水浴鍋中保溫3h，最后于100℃滅酶5min，4000r/min離心15min，去掉沉淀物，合并上清液，即得去除蛋白多糖溶液，將已去除蛋白的粗龍眼肉多糖配成5.00g/ml的水溶液，滴加30%H₂O₂去除色素，用量為多糖溶液體積的15.00%，用0.10mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)多糖液的pH值為8.0，于45℃水浴中反應(yīng)，每隔30min檢測一次pH值，確保反應(yīng)過程中反應(yīng)液的pH值維持在8.0，4h后終止反應(yīng)，冷至室溫，用0.10mol/L鹽酸調(diào)回中性，加入氯化鈉，使其濃度為5.00g/ml，然后緩慢加入無水乙醇，使其含量達(dá)35～40%，在冰箱中4℃放置過夜，次日離心收集沉淀，經(jīng)無水乙醇、丙酮反復(fù)洗滌后，45℃減壓干燥，得到去除蛋白及色素后的龍眼肉粗多糖，

（3）去除蛋白及色素后的龍眼肉粗多糖二乙胺基乙基纖維素柱分級純化

用二乙胺基乙基纖維素作為柱填料，柱參數(shù)為：Φ2.5cm×40cm，分別用雙餾水、0.125mol/L的NaCl、0.30mol/L的NaOH溶液作為洗脫液進(jìn)行洗脫，控制流速6s/滴，每10ml收集一管，用改良的苯酚-硫酸法跟蹤檢測，合并正態(tài)峰的收集液，50℃減壓濃縮，濃縮液透析48小時(shí)后再濃縮、干燥，得到氯化鈉流分的龍眼肉多糖，

（4）氯化鈉流分的龍眼肉多糖丙烯葡聚糖凝膠S-300HR柱純化

取氯化鈉流分的龍眼肉多糖，用Φ2.0cm×40cm的丙烯葡聚糖凝膠S-300HR柱作進(jìn)一步純化，洗脫液為蒸餾水，洗脫條件為1滴/4s，洗脫流分分別進(jìn)行減壓濃縮后進(jìn)行醇沉，離心，沉淀真空干燥，取第一個(gè)洗脫流分干燥后的多糖，命名為龍眼肉多糖A，并用龍眼肉多糖A進(jìn)行磷酸酯化，

（5）磷酸酯化龍眼肉多糖的合成

配制0.025g/ml的龍眼肉多糖A溶液，取1.00ml磷酸酯化試劑POCl₃，加入3ml的吡啶，0℃反應(yīng)15min后，緩慢加入0.025g/ml的龍眼肉多糖A溶液20.0ml，在0℃下進(jìn)行反應(yīng)60min，再加入濃度為10mol/L的NaOH溶液調(diào)至pH=7.0，再透析24h，除去游離的磷、鹽和吡啶，透析結(jié)束后，傾出溶液，加入1.5倍于傾出溶液的無水乙醇，醇沉，3000r/min離心10min，取沉淀物，再用90%的乙醇洗滌沉淀物3次，45℃減壓干燥即得磷酸酯化龍眼肉多糖。