[發(fā)明專利]荷葉中具α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物及用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210304834.2
• 申請日: 2012-08-25
• 公開（公告）號: CN102827221A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 程翼宇;王毅
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: C07H17/07
• 分類號: C07H17/07;C07H1/08;C07D311/30;C07D311/40;C12Q1/34;A61P3/10
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

1.一種荷葉中具α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物，其特征在于，通過以下步驟實現(xiàn)：

（1）制備鍵合α-葡萄糖苷酶的磁珠

（a）磁珠活化：取磁珠使用2-(N-嗎啡啉)乙磺酸溶液清洗后加入1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亞胺鹽酸鹽溶液和N-羥基琥珀酰亞胺溶液混合均勻，孵育活化30min后移去上清液，并用2-(N-嗎啡啉)乙磺酸溶液清洗；

（b）磁珠鍵合：在活化的磁珠上，加入含α-葡萄糖苷酶的2-(N-嗎啡啉)乙磺酸溶液，震蕩混合均勻，在室溫孵育30min進(jìn)行包被，移去上清液，再用磷酸緩沖液清洗包被的磁珠，棄去清洗液，待用；

（c）鍵合磁珠質(zhì)量考察：將制備的鍵合磁珠分散在磷酸緩沖液中，使用掃描式電子顯微鏡對空白磁珠、α-葡萄糖苷酶鍵合磁珠的表面分別分析，檢查磁珠鍵合情況，采用傅里葉變換紅外光譜儀，測定空白磁珠、α-葡萄糖苷酶、α-葡萄糖苷酶鍵合磁珠的紅外光譜，檢查酶結(jié)合情況，采用磁強計數(shù)儀考察鍵合磁珠的磁力變化情況；

（2）篩選具α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物

（a）具α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物初篩：取100?μl荷葉提取物水溶液2份，分別加到1ml?分散于醋酸銨溶液的鍵合α-葡萄糖苷酶的磁珠和空白磁珠，分別放在振蕩器上混勻，孵育1?h，棄去上清液，用醋酸銨溶液清洗，最后用含10%乙腈的醋酸銨溶液洗脫，取空白磁珠和酶鍵合磁珠的洗脫液進(jìn)行液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析；

（b）目標(biāo)化合物獲取及活性驗證：采用常規(guī)柱色譜分離技術(shù)分離獲取目標(biāo)化合物群，再采用制備液相色譜分離、純化目標(biāo)化合物或購置目標(biāo)化合物標(biāo)準(zhǔn)品；采用酶抑制活性實驗驗證純化的目標(biāo)化合物是否具有α-葡萄糖苷酶抑制活性，計算其半數(shù)抑制濃度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種荷葉中具α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物，其特征在于，所述化合物有槲皮素?3-O-阿拉伯糖基-(1→2)-半乳糖苷、蘆丁、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、異鼠李素-3-O-鼠李糖基-(1→6)-葡萄糖苷(水仙苷)、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、異鼠李素-3-O-β-D-木糖基-(1→2)-β-D-葡萄糖苷、異鼠李素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和槲皮素。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種荷葉中具α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物在制備抗糖尿病藥物中的應(yīng)用。