[發(fā)明專利]天然藥物制劑中藁本內(nèi)酯的測(cè)定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210304749.6
• 申請(qǐng)日: 2012-08-25
• 公開（公告）號(hào): CN102809619A
• 公開（公告）日: 2012-12-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳浩達(dá);劉軍鋒;楊學(xué)林;黃從海;高鈞;張綱;張狀年;姜海
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 石家莊國(guó)域?qū)＠虡?biāo)事務(wù)所有限公司 13112
• 代理人: 白海靜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種天然藥物制劑中藁本內(nèi)酯的測(cè)定方法。

背景技術(shù)

藁本內(nèi)酯是中藥當(dāng)歸、川芎中的重要活性成份之一，其是具淡黃色帶香味的油狀液體，沸點(diǎn)為168~169℃，可溶于乙醇、甲醇、乙醚、乙酸乙酯、石油醚等有機(jī)溶劑，分子式為?C₁₂H₁₄O₂?,相對(duì)分子質(zhì)量為190.24，其結(jié)構(gòu)式如下：

。

藁本內(nèi)酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)為不飽和的苯酞結(jié)構(gòu)，3位上有活潑的丁烯基，均為化學(xué)不穩(wěn)定性因素，容易發(fā)生多種異構(gòu)化反應(yīng)。

目前，含有藁本內(nèi)酯的天然藥物制劑中藁本內(nèi)酯的含量測(cè)定方法主要有HPLC和GC方法，蔣偉，王長(zhǎng)虹等人公開了一種利用HPLC對(duì)當(dāng)歸提取物中藁本內(nèi)酯進(jìn)行定量分析的方法（當(dāng)歸提取物的制備工藝及其質(zhì)量控制，《華西藥學(xué)雜志》，2010，25（1）：87~89），采用C₁₈色譜柱，以磷酸水溶液-乙腈二元系統(tǒng)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0mL*min^-1，檢測(cè)波長(zhǎng)350nm，以藁本內(nèi)酯純品作為對(duì)照，采用外標(biāo)法測(cè)定樣品中的藁本內(nèi)酯含量。

李桂生，馬成俊等人研究發(fā)現(xiàn)（藁本內(nèi)酯的穩(wěn)定性研究及異構(gòu)化產(chǎn)物的GC-MS分析，《中草藥》，2000，31（6）：405~407），藁本內(nèi)酯純品于室溫條件下保存可生成多種異構(gòu)化產(chǎn)物，其主要產(chǎn)物有8種，占異構(gòu)化產(chǎn)物的90.81%。而藁本內(nèi)酯在揮發(fā)油中基本穩(wěn)定，不會(huì)出現(xiàn)純品狀態(tài)下的異構(gòu)化反應(yīng)。

現(xiàn)有的藁本內(nèi)酯測(cè)定方法需要以藁本內(nèi)酯純品為對(duì)照品，由于藁本內(nèi)酯純品穩(wěn)定性極差，極易異構(gòu)化為其他結(jié)構(gòu)相近的苯酞類化合物，因此不能作為國(guó)家法定含量測(cè)定用對(duì)照品對(duì)藁本內(nèi)酯進(jìn)行定量檢測(cè)，往往需要自行提取、純化，并且難以長(zhǎng)期保存，給測(cè)定工作帶來極大的不變，增加了檢測(cè)的難度和成本。目前缺少一種操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、成本低廉的藁本內(nèi)酯測(cè)定方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種穩(wěn)定性好、成本低廉的藁本內(nèi)酯的測(cè)定方法，能夠簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確地測(cè)定天然藥物制劑中藁本內(nèi)酯的含量。

為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明人所采用的技術(shù)方案為：

天然藥物制劑中藁本內(nèi)酯的測(cè)定方法，其包括以下步驟：

（a）稱取含有藁本內(nèi)酯的天然藥物制劑內(nèi)容物，加入到含有堿金屬氫氧化物的乙腈水溶液中，搖勻后于20~30℃下放置1~3天，加入鹽酸調(diào)節(jié)pH至中性，加入乙腈水溶液定容，搖勻后過濾，續(xù)濾液為供試品溶液；

（b）稱取2-（1-戊酮）-1，5-環(huán)已二烯甲酸，加甲醇配制成對(duì)照品溶液，所述對(duì)照品溶液中2-（1-戊酮）-1，5-環(huán)已二烯甲酸的含量為0.05~0.4mg/mL；

（c）采用高效液相色譜法分別測(cè)定對(duì)照品溶液和供試品溶液，色譜條件為：采用以十八烷基鍵合硅膠為填料的色譜柱，以乙腈或甲醇水溶液作為流動(dòng)相，流動(dòng)相的流速為0.5?~2?mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為285nm，柱溫為20~40℃，以外標(biāo)法計(jì)算供試品溶液中2-（1-戊酮）-1，5-環(huán)已二烯甲酸的含量，按照藁本內(nèi)酯與2-（1-戊酮）-1，5-環(huán)已二烯甲酸的摩爾比1:1的比例，換算得到藁本內(nèi)酯的含量。

本發(fā)明所述堿金屬氫氧化物最好為氫氧化鈉或氫氧化鉀，如此水解反應(yīng)更加迅速和充分。

c步驟所述乙腈/水溶液其體積比為20~45：80—55；甲醇/水溶液的體積比為40~65:60~35；所述乙腈水溶液或甲醇水溶液的pH值控制在2~7；調(diào)節(jié)pH值時(shí)，可選用醋酸或磷酸進(jìn)行調(diào)節(jié)。

優(yōu)選乙腈/水的體積比為35：65；甲醇/水的體積比為55：45。

優(yōu)選上述條件時(shí)檢測(cè)時(shí)，色譜峰形好，2-（1-戊酮）-1，5-環(huán)已二烯甲酸與雜質(zhì)峰分離度高。

b步驟所述2-（1-戊酮）-1，5-環(huán)已二烯甲酸的制備方法為：???

取當(dāng)歸油，加入80倍體積比濃度為25%的乙腈水溶液，所述乙腈水溶液中含有質(zhì)量體積比為2—3%的氫氧化鉀，20~30℃下放置1~3天，加鹽酸調(diào)節(jié)?pH值至中性，加入等體積的二氯甲烷提取，提取液減壓濃縮，濃縮液上硅膠柱，依次以體積比濃度為10%、20%、30%丙酮/石油醚混合液進(jìn)行梯度洗脫，分別收集不同的流份，進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)條件如下：