[發(fā)明專利]心肌梗塞易感性無創(chuàng)檢測試劑盒（IL-6等基因）

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210304457.2
• 申請日: 2012-08-24
• 公開（公告）號: CN103627782A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石慧林
• 申請（專利權(quán)）人: 解碼(上海)生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種篩查心肌梗塞高危人群的基因無創(chuàng)檢測試劑盒，其特征在于：檢測APOE基因上ε2ε3ε4?(rs429358,rs7412)、ACE基因上I/D?(rs4646994)、IL-6基因上C-572G?(rs1800796)的3個單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)基因型的特異性引物與DNA測序引物、Taq酶、dNTP混合液、反應(yīng)緩沖液、SAP酶、ExoI酶、BigDye?mix、EDTA溶液、70%乙醇溶液、100%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH₂O等。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的特異性引物對是指針對APOE基因上ε2ε3ε4?(rs429358,rs7412)、ACE基因上I/D?(rs4646994)、IL-6基因上C-572G?(rs1800796)的3個單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)，能特異性擴(kuò)增出包含這3個SNPs位點(diǎn)的DNA片段的引物對。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的DNA測序引物是針對APOE基因上ε2ε3ε4?(rs429358,rs7412)、ACE基因上I/D?(rs4646994)、IL-6基因上C-572G?(rs1800796)的3個單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)而設(shè)計(jì)，能通過DNA測序技術(shù)特異性檢測出上述3個SNPs位點(diǎn)基因型的DNA測序引物。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所示的試劑盒，其特征在于，所含的3對特異性引物序列如下：

（1）APOE（ε2ε3ε4）正向引物：5'?AAATCGGAACTGGAGGAACAA3'

APOE（ε2ε3ε4）反向引物：5'TGCCCATCTCCTCCATCC3'

（2）ACE（I/D）正向引物：5'CTGGGCAACAGAGTGAGACC3'

ACE（I/D）反向引物：5'ACCCAAGTGCCAGTGATGTT3'

（3）IL-6?(C-572G)?正向引物：5'CAGCAGCCAACCTCCTCTAA3'

?????IL-6?(C-572G)?反向引物：5'CCAAGCCTGGGATTATGAAG3'。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所含的3條DNA測序引物序列如下：

（1）APOE（ε2ε3ε4）測序引物：5'AAATCGGAACTGGAGGAACAA3'

（2）ACE（I/D）測序引物：5'CTGGGCAACAGAGTGAGACC3'

（3）IL-6?(C-572G)測序引物：5'?CAGCAGCCAACCTCCTCTAA3'。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于試劑盒的組分和含量包括：

（1）PCR反應(yīng)體系：10×PCR反應(yīng)緩沖液2.5ul，25mM?dNTP混合液0.2ul，5U／ul?Taq?DNA聚合酶?0.125ul，20uM特異性引物對，每條引物各0.25ul，ddH₂O?19.175ul；

（2）PCR產(chǎn)物純化體系：1?U／ul?SAP酶0.75ul，10?U／ul?ExoI酶0.375ul，ddH₂O?3.875ul；

（3）測序反應(yīng)體系：25%?BigDye?mix1ul，3.2uM?DNA測序引物1ul，125mM?EDTA溶液1ul，100%乙醇溶液15ul，70%乙醇溶液30ul，HIDI溶液8ul，ddH₂O?2ul。

7.本試劑盒供一人份檢測應(yīng)用，試劑盒的保存溫度為-20℃。