[發明專利]心肌梗塞易感性無創檢測試劑盒（IL-6等基因）

無效

• 申請號: 201210304457.2
• 申請日: 2012-08-24
• 公開（公告）號: CN103627782A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 石慧林
• 申請（專利權）人: 解碼(上海)生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本項目屬于分子生物學領域，涉及醫學和生物技術，具體涉及一種心肌梗塞易感基因檢測試劑盒，根據檢測結果從基因層面評估心肌梗塞發病的風險級別，并作為預防和治療心肌梗塞的方向指導。

背景技術

心肌梗塞是一種急性的且會引起生命危險的心臟狀態。其病因是由于部分心肌的血液循環中斷而使相應心肌出現嚴重的持久性急性缺血，從而最終導致心肌缺血性壞死。其臨床癥狀可表現為胸骨后劇烈疼痛、不適、暈眩等，并出現心律失常、休克和心力衰竭等現象，有時甚至會喪失知覺。在發展中國家心肌梗塞仍是最大的死亡原因之一，發生后一年內的死亡率約為50%。因此開發出一種便捷、高效的心肌梗塞易感性檢測技術將對于預防和治療心肌梗塞具有積極的意義。目前已經有研究表明血管緊張素轉化酶(ACE)和載脂蛋白E(ApoE)等基因的單核苷酸多態性均與心肌梗塞的易感性有直接關聯，在預防和治療心肌梗塞中具有一定的預測價值。

腎素-血管緊張素系統在心血管系統中起著舉足輕重的作用，而ACE是腎素-血管緊張素系統的重要成分，負責將血管緊張素I轉化為有生物活性的血管緊張素II，能影響心肌和血管平滑肌細胞的增殖。ACE第16內含子中由287個堿基對組成的Alu重復序列的存在（I）或缺失（D）被稱為插入/缺失（I/D）多態性。ACE的DD基因型可導致較高水平的血管緊張素II并引起心律失常。在中國漢族人群中已經發現心肌梗死患者ACE基因的DD基因型和D等位基因頻率均顯著高于正常人，被認為是心肌梗塞的一個獨立危險因素。另外在2型糖尿病患者中也發現心肌梗塞并發者的DD純合子頻率顯著增高，認為該基因型是心肌梗塞的風險因子。

ApoE是由299個氨基酸構成的含磷脂糖蛋白，是血漿脂蛋白的重要組成部分并直接參與膽固醇代謝。ApoE主要有ε2、ε3和ε4三種等位基因，分別編碼E2、E3和E4三種不同的異構體。許多研究表明在心肌梗塞患者中ApoEε4/ε3基因型和ε4等位基因頻率均顯著高于正常人群。因此，ApoEε4等位基因被認為是心肌梗塞的重要遺傳標記。至于ApoEε4對心肌梗塞的具體作用機制尚不清楚，初步認為是由于改變了血脂水平所導致的。在心肌梗塞中，ApoEε4等位基因與ACE基因D等位基因有協同關系。

綜上所述，鑒于ACE基因和ApoE基因在心肌梗塞疾病中體現出來的疾病顯著相關性，可以通過檢測這些心肌梗塞發生相關基因單核苷酸位點基因型來及時篩查出易患心肌梗塞的高危人群，從而有針對性地預防和治療，這對于降低心肌梗塞的發病率有非常重要的意義。

發明內容

基于APOE基因上ε2ε3ε4?(rs429358,rs7412)、ACE基因上I/D?(rs4646994)、IL-6基因上C-572G?(rs1800796)的3個單核苷酸多態性位點基因型可用來評估心肌梗塞發病風險級別，本發明提供一種心肌梗塞基因無創檢測試劑盒。

該試劑盒包括：

檢測APOE基因上ε2ε3ε4?(rs429358,rs7412)、ACE基因上I/D?(rs4646994)、IL-6基因上C-572G?(rs1800796)的3個單核苷酸多態性位點基因型的特異性引物對及DNA測序引物。

PCR反應組件（包括Taq酶、dNTP混合液、反應緩沖液、ddH2O等）。

PCR產物純化組件（包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等）。

DNA測序反應組件（包括BigDye?mix，EDTA溶液、100%乙醇溶液、70%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等）。

本發明試劑盒的組分和含量包括：

PCR反應體系：10×PCR反應緩沖液?2.5ul；25mM?dNTP混合液0.2ul；5U/ul?Taq?DNA聚合酶0.125ul；20uM特異性引物對（每條引物各0.25ul）；ddH2O?19.175ul。

PCR產物純化體系：1U/ul?SAP酶?0.75ul；10U/ul?ExoI酶0.375ul；ddH2O?3.875ul。

測序反應體系：25%BigDye?mix?1ul；3.2uM?DNA測序引物1ul；125mM?EDTA溶液1ul；100%乙醇溶液?15ul；70%乙醇溶液30ul；HIDI溶液8ul；ddH2O?2ul。

本試劑盒供一人份檢測使用，試劑盒的保存溫度為-20℃。

具體實施方式