[發明專利]一種IPTG誘導豬圓環病毒2型重組Cap蛋白表達的方法有效
| 申請號： | 201210302993.9 | 申請日： | 2012-08-23 |
| 公開（公告）號： | CN102978232A | 公開（公告）日： | 2013-03-20 |
| 發明（設計）人： | 吳紅云;徐進;王衛芳 | 申請（專利權）人： | 鄭州后羿制藥有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N15/34;C07K14/01 |
| 代理公司： | 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119 | 代理人： | 牛愛周 |
| 地址： | 451162 河南*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 iptg 誘導 圓環 病毒 重組 cap 蛋白 表達 方法 | ||
1.一種IPTG誘導豬圓環病毒2型重組Cap蛋白表達的方法，其特征在于，具體步驟如下：
1）將pET28a-PCV2-ORF2原核表達載體，轉化大腸桿菌DH5a，經過選擇性培養、單克隆液體培養、PCR檢測，選擇帶有目的條帶的菌液提取質粒；
2）將提取的質粒，轉化大腸桿菌BL21(DE3)，經過選擇性培養、單克隆液體培養、PCR檢測，選擇帶有目的條帶的菌液，轉接培養；
3）在轉接培養的菌液中加入IPTG，在IPTG終濃度0.1-1.0mmlo/L條件下，10-37℃誘導豬圓環病毒2型重組Cap蛋白表達1-8小時；
4）取步驟3）不同條件制得的菌液，離心，棄上清液；
5）在沉淀中加入loading?buffer混勻，沸水浴后迅速冷卻；
6）離心，得到含有Cap蛋白的上清液。
2.根據權利要求1所述的一種IPTG誘導豬圓環病毒2型重組Cap蛋白表達的方法，其特征在于，所述的重組表達載體pET28a-PCV2-ORF2兩次轉化所用的培養基為SOC。
3.根據權利要求1所述的一種IPTG誘導豬圓環病毒2型重組Cap蛋白表達的方法，其特征在于，所述的選擇性培養和單克隆液體培養采用的培養基均為LB+1‰Kana。
4.根據權利要求1所述的一種IPTG誘導豬圓環病毒2型重組Cap蛋白表達的方法，其特征在于，最佳誘導條件為IPTG終濃度0.6mmol/L，誘導溫度30℃，誘導時間6h。
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