[發(fā)明專利]一種IPTG誘導(dǎo)豬圓環(huán)病毒2型重組Cap蛋白表達(dá)的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210302993.9 | 申請日： | 2012-08-23 |
| 公開（公告）號： | CN102978232A | 公開（公告）日： | 2013-03-20 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 吳紅云;徐進(jìn);王衛(wèi)芳 | 申請（專利權(quán)）人： | 鄭州后羿制藥有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N15/34;C07K14/01 |
| 代理公司： | 鄭州睿信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119 | 代理人： | 牛愛周 |
| 地址： | 451162 河南*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 iptg 誘導(dǎo) 圓環(huán) 病毒 重組 cap 蛋白 表達(dá) 方法 | ||
1.一種IPTG誘導(dǎo)豬圓環(huán)病毒2型重組Cap蛋白表達(dá)的方法，其特征在于，具體步驟如下：
1）將pET28a-PCV2-ORF2原核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a，經(jīng)過選擇性培養(yǎng)、單克隆液體培養(yǎng)、PCR檢測，選擇帶有目的條帶的菌液提取質(zhì)粒；
2）將提取的質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，經(jīng)過選擇性培養(yǎng)、單克隆液體培養(yǎng)、PCR檢測，選擇帶有目的條帶的菌液，轉(zhuǎn)接培養(yǎng)；
3）在轉(zhuǎn)接培養(yǎng)的菌液中加入IPTG，在IPTG終濃度0.1-1.0mmlo/L條件下，10-37℃誘導(dǎo)豬圓環(huán)病毒2型重組Cap蛋白表達(dá)1-8小時(shí)；
4）取步驟3）不同條件制得的菌液，離心，棄上清液；
5）在沉淀中加入loading?buffer混勻，沸水浴后迅速冷卻；
6）離心，得到含有Cap蛋白的上清液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種IPTG誘導(dǎo)豬圓環(huán)病毒2型重組Cap蛋白表達(dá)的方法，其特征在于，所述的重組表達(dá)載體pET28a-PCV2-ORF2兩次轉(zhuǎn)化所用的培養(yǎng)基為SOC。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種IPTG誘導(dǎo)豬圓環(huán)病毒2型重組Cap蛋白表達(dá)的方法，其特征在于，所述的選擇性培養(yǎng)和單克隆液體培養(yǎng)采用的培養(yǎng)基均為LB+1‰Kana。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種IPTG誘導(dǎo)豬圓環(huán)病毒2型重組Cap蛋白表達(dá)的方法，其特征在于，最佳誘導(dǎo)條件為IPTG終濃度0.6mmol/L，誘導(dǎo)溫度30℃，誘導(dǎo)時(shí)間6h。
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