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[發明專利]一種IPTG誘導豬圓環病毒2型重組Cap蛋白表達的方法有效

專利信息
申請號: 201210302993.9 申請日: 2012-08-23
公開(公告)號: CN102978232A 公開(公告)日: 2013-03-20
發明(設計)人: 吳紅云;徐進;王衛芳 申請(專利權)人: 鄭州后羿制藥有限公司
主分類號: C12N15/70 分類號: C12N15/70;C12N15/34;C07K14/01
代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119 代理人: 牛愛周
地址: 451162 河南*** 國省代碼: 河南;41
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 一種 iptg 誘導 圓環 病毒 重組 cap 蛋白 表達 方法
【權利要求書】:

1.一種IPTG誘導豬圓環病毒2型重組Cap蛋白表達的方法,其特征在于,具體步驟如下:

1)將pET28a-PCV2-ORF2原核表達載體,轉化大腸桿菌DH5a,經過選擇性培養、單克隆液體培養、PCR檢測,選擇帶有目的條帶的菌液提取質粒;

2)將提取的質粒,轉化大腸桿菌BL21(DE3),經過選擇性培養、單克隆液體培養、PCR檢測,選擇帶有目的條帶的菌液,轉接培養;

3)在轉接培養的菌液中加入IPTG,在IPTG終濃度0.1-1.0mmlo/L條件下,10-37℃誘導豬圓環病毒2型重組Cap蛋白表達1-8小時;

4)取步驟3)不同條件制得的菌液,離心,棄上清液;

5)在沉淀中加入loading?buffer混勻,沸水浴后迅速冷卻;

6)離心,得到含有Cap蛋白的上清液。

2.根據權利要求1所述的一種IPTG誘導豬圓環病毒2型重組Cap蛋白表達的方法,其特征在于,所述的重組表達載體pET28a-PCV2-ORF2兩次轉化所用的培養基為SOC。

3.根據權利要求1所述的一種IPTG誘導豬圓環病毒2型重組Cap蛋白表達的方法,其特征在于,所述的選擇性培養和單克隆液體培養采用的培養基均為LB+1‰Kana。

4.根據權利要求1所述的一種IPTG誘導豬圓環病毒2型重組Cap蛋白表達的方法,其特征在于,最佳誘導條件為IPTG終濃度0.6mmol/L,誘導溫度30℃,誘導時間6h。

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