[發(fā)明專利]一種誘導人多能干細胞分化為視網(wǎng)膜前體細胞的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210301765.X | 申請日： | 2012-08-22 |
| 公開（公告）號： | CN103627669A | 公開（公告）日： | 2014-03-12 |
| 發(fā)明（設計）人： | 王曉冰;周國民;張素春 | 申請（專利權）人： | 復旦大學 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071;A61K35/44;A61P27/02;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 上海元一成知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吳桂琴 |
| 地址： | 200433 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 誘導 多能 干細胞 化為 視網(wǎng)膜 體細胞 方法 | ||
1.一種誘導人多能干細胞分化為視網(wǎng)膜前體細胞的方法，其特征在于，將人胚胎干細胞或人誘導的多能干細胞在含有N2的培養(yǎng)基中誘導后，轉(zhuǎn)入含有神經(jīng)基礎培養(yǎng)基、敲除的血清替代物和煙酰胺的視網(wǎng)膜誘導培養(yǎng)基，獲得視網(wǎng)膜前體細胞，其包括步驟：
（1）將人多能干細胞消化后，制成細胞球，第3天更換培養(yǎng)基為神經(jīng)誘導分化培液；
（2）第7天進行貼壁，第14天更換培養(yǎng)基為視網(wǎng)膜細胞誘導分化培液，得神經(jīng)管樣的細胞結構；
（3）第16天將形成的類神經(jīng)管樣結構吹下來，第17天將大的細胞球吹成稍小的細胞球，形成典型的視杯樣細胞球；
（4）第21天獲得形態(tài)結構典型的視杯樣細胞球。
2.按權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）第3天更換培養(yǎng)基為含有1%N2、0.1mM非必需氨基酸和2mM?L-谷氨酰氨的神經(jīng)誘導分化培液。
3.按權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）第7天貼壁時，用10%胎牛血清促進細胞球貼壁，且使用時間16個小時。
4.按權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中的視網(wǎng)膜細胞誘導分化培液中，含有Neurobasal培養(yǎng)基、14%血清替代物、5ml非必須氨基酸、2mM?L-谷氨酰氨以及10mM煙酰胺。
5.權利要求1的誘導人多能干細胞分化為視網(wǎng)膜前體細胞的方法制得的視網(wǎng)膜前體細胞在制備移植治療視網(wǎng)膜細胞不可逆性變性疾病藥物中的用途。
6.按權利要求5所述的用途，其特征在于，所述的視網(wǎng)膜細胞不可逆性變性疾病是年齡相關性黃斑變性或視網(wǎng)膜色素變性。
7.權利要求1的誘導人多能干細胞分化為視網(wǎng)膜前體細胞的方法制得的視網(wǎng)膜前體細胞在制備iPS細胞藥物篩模型中的用途。
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