[發明專利]綠色巴夫藻培養基配方及三級培養方法

有效

• 申請號: 201210301002.5
• 申請日: 2012-08-23
• 公開（公告）號: CN102851213A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 王培磊
• 申請（專利權）人: 王培磊
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于海洋微藻養殖領域，尤其涉及一種綠色巴夫藻培養基配方及三級培養方法。

背景技術

綠色巴夫藻Pavlova?viridid是一種海洋微藻，屬金藻門、普林藻綱、巴夫藻目、巴夫藻科、巴夫藻屬，無細胞壁、個體微小、繁殖快、營養豐富，適于水產動物幼體攝食和消化，尤其富含水產經濟動物幼體生長和發育所必需的二十二碳六烯酸EPA，是一種優質單胞藻餌料，廣泛應用于蝦、蟹、貝類幼體及海水仔魚人工育苗。因EPA和DHA也是人體必需脂肪酸，可預防和治療多種疾病，價值越來越受到科研工作者重視。

綠色巴夫藻的培養傳統上使用MAV培養液配方(即KNO₃100mg，KH₂PO₄10mg，FeSO₄·7H₂O?2.5mg，MgSO₄?0.25mg，EDTA-Na₂?10mg，VB₁₂?5×10^-7mg，VB₁?6×10^-3mg，海水1000mL)。用此培養基，生長速度慢，產量低。我的實驗表明，用尿素取代硝酸鹽，生長速度快，且飽和與單不飽和脂肪酸含量高。尿素組密度可達30×10⁶?cell/mL，而KNO₃最高密度僅為19×10⁶?cell/mL。以前綠色巴夫藻培養基中是不加碳源的，但我的實驗表明，添加適量的NaHCO₃，有利于綠色巴夫藻的生長。

過去很長一段時間人們一直認為，水體中游離CO₂是藻類利用外源無機碳的唯一形式。1910年，Angelstein首次提出并證實HCO₃^-可作為水生植物的無機碳源。此后大量研究表明，除CO₂外，HCO₃^-也是海洋植物的主要無機碳源。岳國峰的實驗表明，條斑紫菜可間接吸收HCO₃^-。胞外碳酸酐酶(CA)催化HCO₃^-水解成擴散進入胞內是條斑紫菜無機碳利用的主要形式，占全部無機碳利用的73％以上。張學成的工作也表明，螺旋藻培養基中添加50-100mmol/L?NaHCO₃時，不僅可以滿足螺旋藻生長的需要，而且有助于保持藻體生長的pH值。另外一些研究表明，藍藻如多變魚腥藻(Anabaena?variabili)、聚胞藻(Synechococcus)、大型紅藻如江蘺(Gracilaria)、條斑紫菜(Porphyra?yezoensis?Ueda)等可以利用HCO₃^-作為碳源。Mortain用¹⁴C方法直接證明了硅藻在光合作用中可以同化CO₂，也可以同化HCO₃^-。Sivak等報道，螺旋藻的光合放氧率遠遠高于CO₂的利用率，從另一角度證明了螺旋藻可以利用HCO^-₃。林惠民認為，NaHCO₃在培養基中的作用之一是作為碳源。水體中的總溶解無機碳(TIC)有4種存在形式：CO₂、H₂CO₃、HCO₃^-和CO₃^2-。它們存在如下化學平衡

CO₂+H₂O＝H₂CO₃＝HCO₃^-+H⁺＝CO₃^2-+2H⁺

它們之間的平衡又與溶液pH值有密切關系。另外，我還在培養基中補充了f/2微量元素和f/2維生素，營養更加全面、均衡，有助于產量的提高。