[發明專利]單載體雙向啟動的Tet-on誘導表達系統及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 201210300572.2
• 申請日: 2012-08-22
• 公開（公告）號: CN102816793A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發明（設計）人: 夏海濱;陳皓
• 申請（專利權）人: 陜西師范大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/64;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司 61201
• 代理人: 申忠才

1.一種單載體雙向啟動的Tet-on誘導表達系統，其特征在于：其元件的連接順序為5-’CMV-TetR-KRAB-SV40polyA-rtTA2S-M2-EB-PminCMV-KB-TRE-Tight-PminCMV-EcoRⅠ-Spe?Ⅰ-SV40polyA-3’，Tight-PminCMV左側的復合元件rtTA2S-M2-EB-PminCMV-KB-TRE的連接方式為3’-rtTA2S-M2-EB-PminCMV-KB-TRE-5’-5’-Tight-PminCMV-3’，其余元件均按與該系統相同方向5’-3’順序連接；兩個酶切位點EcoR?Ⅰ和SpeⅠ位于元件Tight-PminCMV和元件SV40polyA之間，該系統序列如下：

ggtaccaata?gttattaata?gtaatcaatt?acggggtcat?tagttcatag?cccatatatg?????60

gagttccgcg?ttacataact?tacggtaaat?ggcccgcctg?gctgaccgcc?caacgacccc????120

cgcccattga?cgtcaataat?gacgtatgtt?cccatagtaa?cgccaatagg?gactttccat????180

tgacgtcaat?gggtggagta?tttacggtaa?actgcccact?tggcagtaca?tcaagtgtat????240

catatgccaa?gtacgccccc?tattgacgtc?aatgacggta?aatggcccgc?ctggcattat????300

gcccagtaca?tgaccttatg?ggactttcct?acttggcagt?acatctacgt?attagtcatc????360

gctattacca?tggtgatgcg?gttttggcag?tacatcaatg?ggcgtggata?gcggtttgac????420

tcacggggat?ttccaagtct?ccaccccatt?gacgtcaatg?ggagtttgtt?ttggcaccaa????480

aatcaacggg?actttccaaa?atgtcgtaac?aactccgccc?cattgacgca?aatgggcggt????540

aggcgtgtac?ggtgggaggt?ctatataagc?agagctggtt?tagtgaaccg?tcagatcatc????600

gatatggcta?gattagataa?aagtaaagtg?attaacagcg?cattagagct?gcttaatgag????660

gtcggaatcg?aaggtttaac?aacccgtaaa?ctcgcccaga?agctaggtgt?agagcagcct????720

acattgtatt?ggcatgtaaa?aaataagcgg?gctttgctcg?acgccttagc?cattgagatg????780

ttagataggc?accatactca?cttttgccct?ttagaagggg?aaagctggca?agatttttta????840

cgtaataacg?ctaaaagttt?tagatgtgct?ttactaagtc?atcgcgatgg?agcaaaagta????900

catttaggta?cacggcctac?agaaaaacag?tatgaaactc?tcgaaaatca?attagccttt????960

ttatgccaac?aaggtttttc?actagagaat?gcattatatg?cactcagcgc?tgtggggcat???1020

tttactttag?gttgcgtatt?ggaagatcaa?gagcatcaag?tcgctaaaga?agaaagggaa???1080

acacctacta?ctgatagtat?gccgccatta?ttacgacaag?ctatcgaatt?atttgatcac???1140

caaggtgcag?agccagcctt?cttattcggc?cttgaattga?tcatatgcgg?attagaaaaa???1200

caacttaaat?gtgaaagtgg?gtcgccaaaa?aagaagagaa?aggtcgacgg?cggtggtgct???1260

ttgtctcctc?agcactctgc?tgtcactcaa?ggaagtatca?tcaagaacaa?ggagggcatg???1320

gatgctaagt?cactaactgc?ctggtcccgg?acactggtga?ccttcaagga?tgtatttgtg???1380

gacttcacca?gggaggagtg?gaagctgctg?gacactgctc?agcagatcgt?gtacagaaat???1440

gtgatgctgg?agaactataa?gaacctggtt?tccttgggtt?atcagcttac?taagccagat???1500

gtgatcctcc?ggttggagaa?gggagaagag?ccctggctgg?tggagagaga?aattcaccaa???1560

gagacccatc?ctgattcaga?gactgcattt?gaaatcaaat?catcagttta?agcggccgcc???1620

acagcgggga?gatccagaca?tgataagata?cattgatgag?tttggacaaa?ccacaactag???1680

aatgcagtga?aaaaaatgct?ttatttgtga?aatttgtgat?gctattgctt?tatttgtaac???1740

cattataagc?tgcaataaac?aagttaacaa?caacaattgc?attcatttta?tgtttcaggt???1800

tcagggggag?gtgtgggagg?ttttttaaag?caagtaaaac?ctctacaaat?gtggtatggc???1860

tgattatgat?ccggctgcct?cgcgcgtttc?ggtgatgacg?gtgaaaacct?ctgacacatg???1920

cagctcccgg?agacggtcac?agcttgtctg?taagcggatg?ccgggagcag?acaagcccgt????1980

cagggcgcgt?cagcgggtgt?tggcgggtgt?cggggcgcag?ccatgagtct?agtttacccg????2040

gggagcatgt?caaggtcaaa?atcgtcaaga?gcgtcagcag?gcagcatatc?aaggtcaaag????2100

tcgtcaaggg?catcggctgg?gagcatgtct?aagtcaaaat?cgtcaagggc?gtcggccggc????2160

ccgccgcttt?cgcactttag?ctgtttctcc?aggccacata?tgattagttc?caggccgaaa????2220

aggaaggcag?gttcggctcc?ctgccggtcg?aacagctcaa?ttgcttgtct?cagaagtggg????2280

ggcatagaat?cggtggtagg?tgtctctctt?tcctcttttg?ctacttgatg?ctcctgttcc????2340

tccaatacgc?agcccagtgt?aaagtggccc?acggcggaca?gagcgtacag?tgcgttctcc????2400

agggagaagc?cttgctgaca?caggaacgcg?agctgatttt?ccagggtttc?gtactgtttc????2460

tctgttgggc?gggtgccgag?atgcacttta?gccccgtcgc?gatgtgagag?gagagcacag????2520

cggaatgact?tggcgttgtt?ccgcagaaag?tcttgccatg?actcgccttc?cagggggcag????2580

aagtgggtat?gatgcctgtc?cagcatctcg?attggcaggg?catcgagcag?ggcccgcttg????2640

ttcttcacgt?gccagtacag?ggtaggctgc?tcaactccca?gcttttgagc?gagtttcctt????2700

gtcgtcaggc?cttcgatacc?gactccattg?agtaattcca?gagcgccgtt?tatgactttg????2760

ctcttgtcca?gtctagacat?gaattaattc?cgcgatctga?cggttcacta?aacgagctct????2820

gcttatatag?gcctcccacc?gtacacgcct?agcgagctcg?actttcactt?ttctctatca????2880

ctgataggga?gtggtaaact?cgactttcac?ttttctctat?cactgatagg?gagtggtaaa????2940

ctcgactttc?acttttctct?atcactgata?gggagtggta?aactcgactt?tcacttttct????3000

ctatcactga?tagggagtgg?taaactcgac?tttcactttt?ctctatcact?gatagggagt????3060

ggtaaactcg?actttcactt?ttctctatca?ctgataggga?gtggtaaact?cgactttcac????3120

ttttctctat?cactgatagg?gagtggtaaa?ctcgactagg?cgtgtacggt?gggaggccta????3180

tataagcaga?gctcgtttag?tgaaccgtca?gatcgcgaat?tcactagtac?tagacacagc????3240

ggggagatcc?agacatgata?agatacattg?atgagtttgg?acaaaccaca?actagaatgc????3300

agtgaaaaaa?atgctttatt?tgtgaaattt?gtgatgctat?tgctttattt?gtaaccatta????3360

taagctgcaa?taaacaagtt?aacaacaaca?attgcattca?ttttatgttt?caggttcagg????3420

gggaggtgtg?ggaggttttt?taaagcaagt?aaaacctcta?caaatgtggt?atggctgatt????3480

atgatccggc?tgcctcgcgc?gtttcggtga?tgacggtgaa?aacctctgac?acatgcagct????3540

cccggagacg?gtcacagctt?gtctgtaagc?ggatgccggg?agcagacaag?cccgtcaggg????3600

cgcgtcagcg?ggtgttggcg?ggtgtcgggg?cgcagccatg?agagatct?????????????????3648。