[發明專利]微擬球藻培養基配方及三級培養方法

在審

• 申請號: 201210298905.2
• 申請日: 2012-08-22
• 公開（公告）號: CN102851211A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 王培磊
• 申請（專利權）人: 王培磊
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于海洋微藻養殖領域，尤其涉及一種微擬球藻培養基配方及三級培養方法。

背景技術

微擬球藻(Nannochloropsis?oculata)又稱微綠球藻，是一種廣泛分布的海水藻類，直徑為2-4微米，細胞球形，淡綠色，富含不飽和脂肪酸及其它營養元素，其中EPA含量占脂肪酸總量的30％。EPA能降低膽固醇和甘油三酯的含量，促進體內飽和脂肪酸代謝，從而降低血液粘稠度，增進血液循環，提高組織供氧而消除疲勞，并防止脂肪在血管壁的沉積，預防動脈粥樣硬化的形成和發展、預防腦血栓、腦溢血、高血壓等心腦血管疾病。EPA在減輕炎癥方面也起著重要的作用。另外，微擬球藻油脂含量占干重的68％以上，是提煉生物柴油的理想微藻。

目前，微擬球藻規模化培養存在的主要問題是生長緩慢，生物量低，易污染，特別是梅雨季節，不利于大規模培養。以前使用的微擬球藻培養基沒有加入碳酸氫鈉，但我的實驗表明，微擬球藻除了能利用空氣中游離的CO2，還能有效地利用培養液中的HCO3-作為碳源。大量實驗表明：添加0.5g/L的碳酸氫鈉能能很好地促進微擬球藻的生長。另外，我還在培養基中補充了檸檬酸鐵、維生素H、赤霉素和人尿，能將產量提高54％。

總之，使用優化培養基并采用三級培養微擬球藻方法具有生長速度快、產量高、成本低、不易污染的優勢。

發明內容

為了克服目前技術的不足，本發明提供了一種微擬球藻配方及三級培養方法，具體技術方案如下：

一種微擬球藻培養基，配方如下：NaNO₃?7.5×10^-2g，KH₂PO₄?1×10^-2g，NaHCO₃?5×10^-1g，檸檬酸鐵(FeC₆H₅O₇.5H₂O)2×10^-4g，VB₁₂?5×10^-7g，VB₁?1×10^-4g，VH?5×10^-7g，九二0植物生長刺激素(即赤霉素)5國際單位，人尿2mL，消毒海水1000mL。

優選地，還包括微量元素0.55～2.25ml/L，所述微量元素配方為：磷酸二氫鈉32～40g/L、硫酸銅1.2～3.2g/L、硫酸鋅4.2～6.2g/L、氯化鈷4～6g/L、氯化錳30～45g/L加水定容至1L。

優選地，所述微量元素溶液中加入120～140g/L的磷酸二氫鈉溶液。

優選地，所述微量元素溶液中加入乙二胺四乙酸二鈉3～10g/L。

應用本發明所提供的培養基對微擬球藻進行三級培養，包括如下步驟：1)一級培養容器為5000mL三角燒瓶，燒瓶用洗液洗滌、晾干、120℃恒溫消毒；培養用的海水比重1.015～1.018，鹽度30～32，經過經脫脂棉過濾、煮沸、冷卻后加入營養鹽；室內培養，室溫20-26℃，室內自然光+輔助日光燈管光源照射，光強3000-10000Lx，光暗周期＝14L:10D，指數增長期藻種接種，接種密度300-350×10⁴cell/mL，不充氣。培養期間每天搖瓶6次。密度達3000×10⁴cell/mL，即可轉入二級培養。2)二級培養容器為50L白塑料桶，白塑料桶刷干凈、漂白粉消毒后用消毒水沖干凈備用。二級培養用的海水經漂白粉消毒、硫代硫酸鈉處理后加入營養鹽；將一級培養的藻液按1∶10的比例接種到白桶。室內培養，室溫20-26℃，室內自然光+輔助日光燈管光源照射，光強3000-10000Lx，光暗周期＝14L:10D，充氣培養，充氣量以能將藻細胞沖起懸浮即可。3)三級培養容器為水泥池。面積20-30m²，池深50cm，水深20-30cm，內貼白色瓷磚，三級培養用海水經漂白粉消毒、硫代硫酸鈉處理。將二級培養的藻液作藻種轉入水泥池培養，室外培養，自然光照射，充氣，接種密度200-300×10⁴cell/mL，培養至密度達2000-3000×10⁴cell/mL即可收獲。

優選地，包括在步驟2)中充氣培養時同時施加臭氧。

優選地，臭氧的濃度為0.5微克/升空氣～0.8微克/升空氣。

有益效果：