[發(fā)明專利]復(fù)方免疫增強劑、禽用滅活疫苗及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210298033.X
• 申請日: 2012-08-21
• 公開（公告）號: CN102793920A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 唐應(yīng)華;陸吉虎;吳培培;劉振興;田震;何家惠;侯繼波
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學院
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/145;A61K39/102;A61K39/12;A61K39/17;A61K31/215;A61K39/235;A61P31/14;A61P31/16;A61P31/20
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務(wù)所(普通合伙) 32238
• 代理人: 張立榮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及復(fù)方免疫增強劑、禽用滅活疫苗及其制備方法。

背景技術(shù)

畜禽各類傳染病的滅活疫苗，對防控這些疫病發(fā)揮了重要作用。使用滅活疫苗希望能夠達到消除性免疫，即在接受某種疫苗免疫后，完全保護機體免受此類疫病的感染發(fā)發(fā)病，或者在感染后不排毒，不將病毒傳播給其它動物。但現(xiàn)有疫苗在應(yīng)用中仍存在一定的缺陷，疫苗質(zhì)量有待于進一步改善。這些缺陷包括以下方面。

現(xiàn)有滅活疫苗免疫機體后抗體產(chǎn)生較慢，抗體持續(xù)期較短，抗體水平整齊度差。常規(guī)滅活疫苗免疫后3周，才能對同型病毒的攻擊提供保護。由于動物個體間的抗體水相差較大，導致群體抗體離散度大。在規(guī)模化養(yǎng)殖條件下，群體中少部分動物因抗體水平較低而發(fā)病，可能會波及整群發(fā)病，帶來災(zāi)難性的后果。臨床生產(chǎn)中常規(guī)疫苗抗體持續(xù)期約為3-4個月。為了使抗體水平整齊度較好，同時使維持較高的抗體水平，一般需多次免疫。這將加大人力投入，同時增加對動物的應(yīng)激反應(yīng)，影響生產(chǎn)性能和飼料報酬。

通常，獸用滅活疫苗配制中抗原用量較多。一方面，疫苗抗原純化工藝不成熟，表現(xiàn)在疫苗抗原中雜蛋白較多，導致副反應(yīng)較大。另外一方面，現(xiàn)有禽用滅活多聯(lián)疫苗在配制時需進行抗原濃縮，以保證疫苗中的抗原含量和疫苗的免疫效果，但增加疫苗的生產(chǎn)成本。臨床生產(chǎn)亟需通過合適的技術(shù)方法，在保證較好的抗體水平情況下，有效降低抗原用量，降低副反應(yīng)。

禽用細菌滅活苗存在免疫原性較弱，激發(fā)機體產(chǎn)生抗體效價低等缺陷。由副雞嗜血桿菌為抗原制備的雞傳染性鼻炎疫苗也存在此類缺陷。但單純從提高由副雞嗜血桿菌抗原量來提高抗體效價，不但使得生產(chǎn)成本提高，也導致疫苗副反應(yīng)增大，難以吸收。臨床應(yīng)用中需要一種技術(shù)克服以上缺點。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是提供一種復(fù)方免疫增強劑，該復(fù)方免疫增強劑能夠縮短現(xiàn)有疫苗免疫窗口期，顯著提高抗體效價，提高抗體整齊度，延長抗體持續(xù)期，有效降低抗原用量和產(chǎn)生消除性免疫。

本發(fā)明的目的之二是提供復(fù)方免疫增強劑的制備方法，該方法簡單易操作。

本發(fā)明的目的之三是提供禽用疫苗，該禽用疫苗含有上述復(fù)方免疫增強劑，疫苗的免疫窗口期縮短，抗體效價高，抗體整齊度高，抗體持續(xù)期長，抗原用量降低，并且能夠產(chǎn)生消除性免疫。

本發(fā)明的目的之四是提供所述禽用疫苗的制備方法，該方法簡單易操作。

采用如下技術(shù)方案實現(xiàn)實現(xiàn)上述目的：

一種復(fù)方免疫增強劑，含有0.5～100?μg/mL的含CpG基序的核酸序列、0.5～1000?μg/mL的α-半乳糖基神經(jīng)酰胺、5～2000μg?/mL的β-葡聚糖和5～2000μg?/mL的左旋咪唑，所述含CpG基序的核酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

該復(fù)方免疫增強劑含有0.5～5μg/mL的含CpG基序的核酸序列、0.5～100μg/mL的α-半乳糖基神經(jīng)酰胺、5～200μg/mL的β-葡聚糖和5～10μg/mL的左旋咪唑。

該復(fù)方免疫增強劑含有5～100μg/mL的含CpG基序的核酸序列、100～1000μg/mL的α-半乳糖基神經(jīng)酰胺、200～2000μg?/mL的β-葡聚糖和10～2000μg?/mL的左旋咪唑。

一種制備所述復(fù)方免疫增強劑的方法，包括下述步驟：

（1）配制水相溶液：在磷酸鹽緩沖液中加入含CpG基序的核酸序列、α-半乳糖基神經(jīng)酰胺、β-葡聚糖和左旋咪唑，然后加入吐溫-80，配制成水相溶液；

（2）配制油相溶液：在白油中加入司盤-80配制成油相溶液；將所述水相溶液與油相溶液充分混合，即得所述復(fù)方免疫增強劑。

所述禽用疫苗含有0.5～100μg/mL的含CpG基序的核酸序列、0.5～1000μg/mL的α-半乳糖基神經(jīng)酰胺、5～2000μg/mL的β-葡聚糖、5～2000μg?/mL的左旋咪唑和滅活疫苗抗原；所述含CpG基序的核酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

所述禽用疫苗優(yōu)選含有0.5～5μg/mL的含CpG基序的核酸序列、0.5～100μg?/mL的α-半乳糖基神經(jīng)酰胺、5～200μg?/mL的β-葡聚糖和5～10μg/mL的左旋咪唑和滅活疫苗抗原。

所述禽用疫苗優(yōu)選：含有5～100μg/mL的含CpG基序的核酸序列、100～1000μg/mL的α-半乳糖基神經(jīng)酰胺、200～2000μg?/mL的β-葡聚糖和10～2000μg?/mL的左旋咪唑和滅活疫苗抗原。