[發明專利]乳香藥材指紋圖譜的建立方法及其標準指紋圖譜

有效

• 申請號: 201210297443.2
• 申請日: 2012-08-21
• 公開（公告）號: CN102809616A
• 公開（公告）日: 2012-12-05
• 發明（設計）人: 李潔;路杰;許飛;崔美蘭;劉杰;高希波
• 申請（專利權）人: 山東齊都藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及中藥材指紋圖譜的建立方法，尤其是乳香藥材HPLC-ELSD指紋圖譜的建立方法，以及由此方法所得到的乳香藥材標準指紋圖譜。屬于藥物分析技術領域。

背景技術

中藥指紋圖譜特指某些中藥材或中藥制劑經適當處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標示其化學特征的色譜圖或光譜圖。指紋圖譜技術是評價中藥質量的重要手段，有利于實現中藥現代化。美國食品藥品管理局在1996年制定的《FDA關于植物制品的指南》中，要求對植物原料、植物藥中間品和植物藥產品提供相應的指紋圖譜。世界衛生組織（WHO）在1996年草藥評價指導原則中也規定，如果草藥的活性成分不明確，可以提供色譜指紋圖譜以證明產品質量的一致。中國國家藥品監督管理部門于2000年發布了《中藥注射劑的指紋圖譜研究的技術要求（暫行）》，明確要求對新申報的中藥注射劑和已上市的中藥注射劑實行指紋圖譜標準。

中藥指紋圖譜技術已涉及眾多方法，包括薄層掃描法（TLCS）、高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）和高效毛細管電泳法（HPCE）等色譜法以及紫外光譜法（UV）、紅外光譜法（IR）、質譜法（MS）、核磁共振法（NMR）和X-射線衍射法等光譜法。其中色譜法為主流方法，尤其是HPLC、TLCS和GC已成為公認的三種常規分析手段。中藥成分絕大多數可在高效液相色譜儀上進行分析檢測，因此高效液相色譜法已成為中藥指紋圖譜技術的首選方法。

乳香為橄欖科植物卡氏乳香樹的膠樹脂，具有調氣活血、定痛、消腫、生肌之功效，臨床主要用于治氣血瘀滯，心腹疼痛，癰瘡腫毒，跌打損傷，風濕痹痛，痛經，產后瘀血刺痛等。乳香所含成分復雜，主要成分含樹脂60%～70%，樹膠27%～35%，揮發油3%～8%，樹脂的主要成分為游離α-乳香酸、β-乳香酸、結合乳香脂酸、乳香樹脂烴，樹膠為阿糖酸的鈣鹽和鎂鹽、西黃芪膠黏素和苦味質，揮發油含蒎烯、莰烯、香檜烯、欖香烯、消旋-檸檬烯等。由于受氣候、產地等因素的影響，不同乳香藥材所含成分也存在一定差異。

發明內容

本發明的目的是提供一種乳香藥材指紋圖譜的建立方法，以及由此方法得到的乳香藥材標準指紋圖譜。本發明通過對乳香藥材高效液相色譜指紋圖譜的研究，提出了一種較好的乳香藥材質量控制方法，使乳香藥材的質量控制更加完善和科學。

本發明乳香藥材高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，包括以下步驟：

（1）供試品溶液的制備：精密稱取藥材粉末10g，置具塞容器中，加入80%～100%的甲醇100ml～800ml，超聲震蕩20min～45min，冷卻后取上清液用0.45μm微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液。

（2）高效液相色譜分析：色譜柱填料5μm?Fortis-C₁₈,520×4.6mm；流動相1%冰醋酸水溶液-甲醇；采用梯度洗脫方式0min→10min→20min→35min→45min→70min→80min→100min→110min→125min，甲醇60%→60%→75%→85%→85%→88%→90%→95%→100%→100%；流速0.8?ml/min～1.2ml/min；柱溫25℃～40℃；檢測器為蒸發光散射檢測器，漂移管溫度80℃～100℃，氣體流速2.0?L/min～3.0?L/min；進樣量為5μl～50μl；記錄140分鐘的色譜圖，得到乳香藥材的指紋圖譜。

（3）標準指紋圖譜的確定：按照本發明提供的方法，對不同來源的12批乳香藥材建立了HPLC-ELSD指紋圖譜，通過分析比較，確定了15個共有特征峰，以參照物3號峰即11-羰基-β-乙酰乳香酸峰為R峰，計算各共有特征峰與R峰的相對保留時間，其相對保留時間應在規定值的±5%內，規定值為：0.801（峰1）、0.813（峰2）、1.000（峰R）、1.039（峰4）、1.096（峰5）、1.188（峰6）、1.225（峰7）、1.297（峰8）、1.354（峰9）、1.468（峰10）、1.538（峰11）、1.690（峰12）、1.715（峰13）、1.856（峰14）、1.919（峰15），這些共有特征峰構成了乳香藥材的指紋特征，可作為乳香藥材的標準指紋圖譜。

本發明具有如下顯著的優點和用途：