[發明專利]擬除蟲菊酯類α-羧乙基硫甲酰溴氰菊酯的半抗原合成方法

無效

• 申請號: 201210295344.0
• 申請日: 2012-08-20
• 公開（公告）號: CN102807614A
• 公開（公告）日: 2012-12-05
• 發明（設計）人: 李相前;任世英
• 申請（專利權）人: 淮陰工學院
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07C327/32
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技術領域

本發明涉及一種α-羧乙基硫甲酰溴氰菊酯半抗原合成方法，屬于有機化學及免疫化學技術領域。

背景技術

免疫分析是基于抗原、抗體的特異性反應的一種分析方法，在醫學上已廣泛應用于微量物質的檢測。免疫分析具有特異性強、靈敏度高，甚至更低、方便快捷、分析容量大、分析成本低、安全可靠等優點，近年來得到迅速發展。

建立免疫分析方法，首先必須制備出對農藥特異性強親和力高的抗體。一般農藥的分子量小于1000，不具備刺激機體產生針對農藥抗原決定簇的特異性抗體，為小分子半抗原，因此必須與大分子載體偶聯后才具有免疫原性。要實現與大分子物質的偶聯，半抗原分子上必須具備能共價結合到載體上的一個活性基團(如氨基、羧基、羥基和巰基等)，對多數不具備活性基團的農藥則通常進行衍生化制備或由原料合成，也可以用其他代謝及降解產物作為半抗原。一般理想的半抗原應盡量具備與待測物類似的立體化學特征，以減少免疫交叉污染，而且應盡量保證半抗原與載體的大分子復合物的特征結構能最大限度地被免疫活性細胞所識別。

典型的半抗原結構中應具備適當末端活性基團，如-NH2、-COOH、-OH、-SH等；同時活性基團與載體之間應具備一定長度的間隔臂，一般為4-6個碳鏈長度(0.5-0.8nm)。間隔臂一般為非極性，且除供偶聯的活性基團外，不應有其它高免疫活性的結構，如苯環、雜環等，以降低抗體對間隔臂的識別和間隔臂對待測物結構特征的影響；間隔臂還應遠離待測物的特征結構部分和官能團，有利于高選擇性和高親合性抗體的產生。

半抗原合成以后，通過化學方法使半抗原分子與載體蛋白連接制備免疫原。用作載體的蛋白通常有牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)、人血清白蛋白(HAS)和鑰孔血藍蛋白(KLH)等。農藥人工抗原合成成功后通常需要經過透析或過柱的方法對其進行純化。對純化后人工抗原進行鑒定，一方面是定性判斷半抗原與載體是否偶聯成功；另一方面是定量測定結合比和蛋白質含量等。判斷是否偶聯成功最簡單的方法為紫外掃描法，如果人工抗原的紫外吸收特征兼具有或不同于原半抗原和載體蛋白的紫外吸收特征，則可初步判斷偶聯成功。

發明內容

本發明目的是建立一種以溴氰菊酯為原料，通過分解、酰氯化、再合成等反應制備半抗原，以獲得對擬除蟲菊酯類農藥特異性強親和力高的抗體。

本發明實施例的另一目的在于提供一種α-羧乙基硫甲酰溴氰菊酯半抗原合成方法，其特征在于，該合成方法包括以下步驟：

溴氰菊酯的分解；

二溴菊酸酰氯的合成：

3-苯氧基苯乙醇酸的合成；

1-羧基-(3’-苯氧苯基)甲基3-2’，2’一二溴乙烯基)-2，2-二甲基環丙烷羧酸酯的合成；

半抗原Hp的合成；

免疫抗原用重氮化法合成人工抗原。

進一步，溴氰菊酯的分解的實現方法包括以下步驟：

將溴氰菊酯15.4克加入到燒瓶中，再加入150ml?1mol/L氫氧化鈉和150ml60％的四氫呋喃，混合物回流3天；并用乙酸乙酯萃取三次，合并有機層，然后洗凈，硫酸鎂干燥，減壓濃縮；使用硅膠柱層析純化，乙酸/石油醚/乙酸乙酸；10∶89.5∶0.5，得到二溴菊酸和3-苯氧基苯甲氰醇。

進一步，二溴菊酸酰氯的合成的實現方法包括以下步驟：

稱取二溴菊酸3g，置于50mL兩口圓底燒瓶中，然后向燒瓶中加入9ml?CHCl₃和1uLDMF，然后立即加入2.1mL氯化亞砜(SOCl₂)，將盛有混合反應物的燒瓶置于油浴鍋中，60-65℃攪拌反應95min，反應完成后將反應混合物的溶劑蒸發干凈，然后在剩余濃縮物質中加入5mL正己烷，再次將反應溶液蒸發干燥后得到淡黃色油狀物二溴菊酸酰氯，直接用于下一步反應。

進一步，3-苯氧基苯乙醇酸的合成方法為：