[發明專利]擬除蟲菊酯類α-羧乙基硫甲酰溴氰菊酯的半抗原合成方法

無效

• 申請號: 201210295344.0
• 申請日: 2012-08-20
• 公開（公告）號: CN102807614A
• 公開（公告）日: 2012-12-05
• 發明（設計）人: 李相前;任世英
• 申請（專利權）人: 淮陰工學院
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07C327/32
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種α-羧乙基硫甲酰溴氰菊酯半抗原合成方法，其特征在于，該合成方法包括以下步驟：

溴氰菊酯的分解；

二溴菊酸酰氯的合成：

3-苯氧基苯乙醇酸的合成；

1-羧基-(3’-苯氧苯基)甲基3-2’，2’一二溴乙烯基)-2，2-二甲基環丙烷羧酸酯的合成；

半抗原Hp的合成；

免疫抗原用重氮化法合成人工抗原。

2.如權利要求1所述的合成方法，其特征在于，溴氰菊酯的分解的實現方法包括以下步驟：

將溴氰菊酯15.4克加入到燒瓶中，再加入150ml?1mol/L氫氧化鈉和150ml60％的四氫呋喃，混合物回流3天；并用乙酸乙酯萃取三次，合并有機層，然后洗凈，硫酸鎂干燥，減壓濃縮；使用硅膠柱層析純化，乙酸/石油醚/乙酸乙酸；10∶89.5∶0.5，得到二溴菊酸和3-苯氧基苯甲氰醇。

3.如權利要求1所述的合成方法，其特征在于，二溴菊酸酰氯的合成的實現方法包括以下步驟：

稱取二溴菊酸3g，置于50mL兩口圓底燒瓶中，然后向燒瓶中加入9ml?CHCl₃和1uLDMF，然后立即加入2.1mL氯化亞砜(SOCl₂)，將盛有混合反應物的燒瓶置于油浴鍋中，60-65℃攪拌反應95min，反應完成后將反應混合物的溶劑蒸發干凈，然后在剩余濃縮物質中加入5mL正己烷，再次將反應溶液蒸發干燥后得到淡黃色油狀物二溴菊酸酰氯，直接用于下一步反應。

4.如權利要求1所述的合成方法，其特征在于，3-苯氧基苯乙醇酸的合成方法為：

稱取3.0g?3-苯氧基苯甲氰醇，約13mmol，置于三角瓶中，加入20mLCH₂Cl₂將其溶解，冰浴磁力攪拌狀態下向溶液中慢慢滴加6mL濃HCl，攪拌反應2h，旋轉蒸發溶劑，將所得產物溶于20mL?CH₂Cl₂裝入分液漏斗，加入20mL水，振蕩分液漏斗，出現大量白色沉淀，收集并干燥白色沉淀，得2.8g產物；將所得產物溶于適量無水乙醇，加入過量的5mol/L?NaOH溶液，40℃攪拌反應過夜，在瓶口放置pH試紙檢測堿性氣體的生成，待堿性氣體不再產生終止反應；向反應混合液中慢慢滴加濃HCl，出現大量白色沉淀，過濾干燥，收集白色沉淀。

5.如權利要求1所述的合成方法，其特征在于，1-羧基-(3’-苯氧苯基)甲基3-2’，2’一二溴乙烯基)-2，2-二甲基環丙烷羧酸酯的合成方法為：

稱取1.0g?3-苯氧基苯乙醇酸，置于50mL圓底燒瓶中，加入5mL丙酮將其溶解。將上述合成的二溴菊酸酰氯溶于5mL丙酮，冰浴磁力攪拌狀態下將酰氯一次性加到燒瓶中，然后加入0.5ml三乙胺，慢慢升溫至室溫，繼續反應2-4h；反應完成后，將反應物過濾，蒸干溶劑，3mol/L?HCl酸化；20mL水洗一次，乙酸乙酯萃取，硅膠柱層析純化，乙酸乙酯/正己烷/乙酸＝1∶9∶0.1，得白色固體0.43g。

6.如權利要求1所述的合成方法，其特征在于，半抗原Hp的合成方法為：

將合成的1-羧基-(3’-苯氧苯基)甲基3-(2’，2’-二溴乙烯基)-2，2-二甲基環丙烷羧酸酯合成酰氯，溶進4mL?1，4-二氧六環，置4℃冰箱冷卻，得A液；稱取B-丙氨酸1.0g，約19mmol，溶進4mL?4mol/L?NaOH溶液，置4℃冰箱冷卻，得B液；另取3mL4mol/LNaOH溶液，置4℃冰箱冷卻，得C液，將A液與C液均分成5等份，每間隔5分鐘向B液中同時各加入1份，整個反應置冰水浴中，磁力攪拌下進行。加樣全部完成后反應過夜，用50mL乙醚沖洗反應液，用濃鹽酸調節反應終液的pH值為4，目標產物用乙酸乙酯萃取；無水Na₂SO₄干燥，所得物減壓蒸餾濃縮。硅膠柱層析純化，乙酸乙酯/石油醚＝4∶1，得淡黃色油狀物，采用核磁共振譜(¹H-NMR)法鑒定半抗原結構。

7.如權利要求1所述的合成方法，其特征在于，免疫抗原用重氮化法合成，具體操作步驟如下：

稱取40mg半抗原Hp溶于1mL?1mol/L?Hcl，可以加入一點二氯甲烷助溶，冰浴攪拌狀態下加入0.3mL?DMF，然后緩慢向反應體系中滴加0.5mL?1％亞硝酸鈉溶液，室溫攪拌反應10min，此即重氮化步驟；重氮化完成后，將溶液緩慢滴加到BSA，50mg溶于10mLPBS，溶液中，冰浴攪拌反應30min，然后置4℃冰箱緩慢反應過夜，將反應終液置透析袋內，于0.01mol/L?pH7.4的PBS溶液中4℃攪拌透析，每4.8小時換一次透析液，共透析3天；透析結束后將透析袋中的蛋白溶液，即為溴氰菊酯人工抗原Hp-BSA，分成若干等份分裝于1mL離心管中，于-20℃冰箱中存放備用。