[發明專利]人異基因有核細胞工業化制備自然殺傷性細胞（NK）及注射液

有效

• 申請號: 201210288669.6
• 申請日: 2012-08-15
• 公開（公告）號: CN102988415A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 王沁怡;王懷林
• 申請（專利權）人: 王沁怡;王懷林
• 主分類號: A61K35/14
• 分類號: A61K35/14;A61K35/44;A61K9/10;A61P37/04;A61P35/00;C12N5/0783
• 代理公司: 寧夏專利服務中心 64100
• 代理人: 葉學軍

1.一種人異基因有核細胞工業化制備的自然殺傷性細胞(NK)注射液，以合法來源的臍帶血或者外周血為原料，采用有核細胞分離提取方法獲得干細胞或者使用Ficoll或percoll密度梯度離心法分選出有核細胞；將上述有核細胞用細胞培養液稀釋，再加上干擾素、白介素、CD3抗體、人血白蛋白，一起灌裝至生物反應器中進行灌流培養，然后進行擴增培養；擴增培養自然殺傷細胞(NK)的傳代次數不小于8代，時間不少于4周；擴增培養后獲得的自然殺傷細胞(NK)的標志物為CD3^-、CD56⁺、CD16⁺、CD57⁺、CD8⁺，其中CD16⁺/CD56⁺≥15％，CD3^-/CD56⁺≥50％，CD8⁺/CD57⁺≥8％，將以上方法獲得的細胞懸液配制成一定濃度的注射液，即為成品。

2.一種從臍帶血或外周血制備自然殺傷細胞(NK)的方法，包括：以合法來源的臍帶血或者外周血為原料，采用有核細胞分離提取方法獲得干細胞或者使用Ficoll或percoll密度梯度離心法分選出有核細胞；將上述有核細胞用細胞培養液稀釋，再加上干擾素、白介素、CD3抗體、人血白蛋白，一起灌裝至生物反應器中進行灌流培養，然后進行擴增培養；擴增培養自然殺傷細胞(NK)的傳代次數不小于8代，時間不少于4周；擴增培養后獲得的自然殺傷細胞(NK)的標志物為CD3^-、CD56⁺、CD16⁺、CD57⁺、CD8⁺，其中CD16⁺/CD56⁺≥15％，CD3^-/CD56⁺≥50％，CD8⁺/CD57⁺≥8％。

3.如權利要求1所述的自然殺傷性細胞(NK)注射液，其特征在于上述培養液是無血清培養液GT-T551或RMPI-1640。

4.如權利要求1所述的自然殺傷性細胞(NK)注射液，其特征在于上述干擾素為γ-干擾素(IFN-γ)。

5.如權利要求1所述的自然殺傷性細胞(NK)注射液，其特征在于上述白介素是以下三種之一或其組合：白介素-2(IL-2)、白介素-1(IL-1)和白介素-7(IL-7)。

6.如權利要求1所述的自然殺傷性細胞(NK)注射液，其特征在于上述灌流培養的溫度是37℃。

7.如權利要求1所述的自然殺傷性細胞(NK)注射液，其特征在于上述擴增培養在生物反應器里或者在工業化使用的灌流培養箱中進行。