[發(fā)明專利]一種亮斑扁角水虻抗菌肽及制備方法和應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210286878.7
• 申請日: 2012-08-13
• 公開（公告）號: CN102816769A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發(fā)明（設計）人: 張吉斌;周定中;王茂淋;左懷雨;喻子牛
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/81;C07K14/435;A61K38/17;A61P31/04;A61P31/10;A23K1/17;A01N47/44;A01P1/00;A01P3/00
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏峰

1.一種分離的抗菌肽基因，其序列為SEQ?ID?NO.1所示。

2.一種分離的抗菌肽基因，其序列為SEQ?ID?NO.2所示。

3.一種權(quán)利要求1或2所述基因編碼的抗菌肽，其序列為SEQ?ID?NO.3所示。

4.一種權(quán)利要求3所述的抗菌肽的制備方法，其步驟為：

A．提取亮斑扁角水虻的總RNA或mRNA為模板，通過反轉(zhuǎn)錄得到亮斑扁角水虻的cDNA第一鏈；

B．查閱抗菌肽數(shù)據(jù)庫，根據(jù)雙翅目昆蟲的抗菌肽進行分析各類抗菌肽的保守區(qū)域，利用Primer5.0來設計簡并引物，設計了6對引物；

C．以步驟A中的cDNA第一鏈為模板，以設計的簡并引物為引物進行基因擴增篩查；

D．瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物，將得到目的大小條帶的PCR產(chǎn)物進行回收；

E．酶切步驟D得到的序列和真核表達載體pPICZαA，并構(gòu)建重組表達載體pPICZαA-Stomoxyn?ZH1；

F．將步驟E中得到的重組表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌宿主細胞進行大量克隆，再將克隆后的重組表達載體電轉(zhuǎn)化至酵母宿主細胞GS115形成表達抗菌肽的重組菌株；

G．將步驟F中得到的重組菌株在30℃條件下用1%的甲醇誘導培養(yǎng)2-3?d獲得培養(yǎng)物；

H．離心步驟F中得到培養(yǎng)物，分離純化上清中表達抗菌肽。

5.一種權(quán)利要求3所述的抗菌肽在制備治療或預防醫(yī)學抗菌感染藥物中的應用。

6.一種權(quán)利要求3所述的抗菌肽在制備商業(yè)動物抗菌飼料添加劑中的應用。

7.一種權(quán)利要求3所述的抗菌肽在制備治療或預防農(nóng)業(yè)植物病害的生物農(nóng)藥中的應用。