[發(fā)明專利]一種捕獲核酸片段的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210286589.7
• 申請(qǐng)日: 2012-08-14
• 公開（公告）號(hào): CN102827830A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 盛司潼
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 盛司潼
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種捕獲核酸片段的方法，其特征在于，包括以下步驟：

A.以含待捕獲核酸片段的核酸分子為原料，利用生物素標(biāo)記的擴(kuò)增引物或接頭元件制備生物素標(biāo)記的捕獲探針；

B.使生物素標(biāo)記的捕獲探針與待捕獲核酸片段庫(kù)雜交，利用含鏈霉親和素或親和素標(biāo)記的固相載體捕獲所述待捕獲核酸片段。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的捕獲核酸片段的方法，其特征在于，所述步驟B包括以下步驟：

B01.利用含鏈霉親和素或親和素標(biāo)記的固相載體捕獲步驟A中的生物素標(biāo)記的捕獲探針，得固定在固相載體上的捕獲探針；

B02.使固定在固相載體上的捕獲探針與待捕獲核酸片段庫(kù)雜交得第一次雜交產(chǎn)物，分離純化第一次雜交產(chǎn)物得含固相載體的第一產(chǎn)物；

B03.使步驟B02得到的產(chǎn)物變性，得第一次捕獲產(chǎn)物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的捕獲核酸片段的方法，其特征在于，在所述步驟B03之后還包括以下步驟：

B04.利用在步驟B01中得到的固定在固相載體上的捕獲探針與步驟B03所得的第一次捕獲產(chǎn)物雜交得第二次雜交產(chǎn)物，分離純化第二次雜交產(chǎn)物得含固相載體的第二產(chǎn)物；

B05.使步驟B04得到的產(chǎn)物變性，得第二次捕獲產(chǎn)物。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的捕獲核酸片段的方法，其特征在于，所述步驟B中的雜交是在周期性震動(dòng)中進(jìn)行的。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的捕獲核酸片段的方法，其特征在于，所述含待捕獲核酸片段的核酸分子為克隆載體庫(kù)；所述步驟A包括以下步驟：

A01.使用限制性酶將克隆載體庫(kù)中的待捕獲核酸片段酶切下來(lái)，從而獲得DNA模板；

A02.片段化DNA模板，得DNA模板片段化產(chǎn)物；

A03.DNA模板片段化產(chǎn)物與生物素標(biāo)記的接頭元件連接，得生物素標(biāo)記的捕獲探針。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的捕獲核酸片段的方法，其特征在于，所述含待捕獲核酸片段的核酸分子為克隆載體庫(kù)；所述步驟A包括以下步驟：

A11.使用限制性酶將克隆載體庫(kù)中的待捕獲核酸片段酶切下來(lái)，從而獲得DNA模板；

A12.片段化DNA模板，得DNA模板片段化產(chǎn)物；

A13.DNA模板片段化產(chǎn)物與接頭元件連接，得含接頭的DNA模板片段；

A14.利用生物素標(biāo)記的擴(kuò)增引物對(duì)步驟A13的產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得生物素標(biāo)記的捕獲探針。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的捕獲核酸片段的方法，其特征在于，所述步驟A之前還包括步驟：

A00.以基因組DNA為模板，利用用于特異性擴(kuò)增待捕獲核酸片段的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得含待捕獲核酸片段的核酸分子。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的捕獲核酸片段的方法，其特征在于，所述步驟A包括以下步驟：

A21.片段化含待捕獲核酸片段的核酸分子，得片段化產(chǎn)物；

A22.片段化產(chǎn)物與接頭元件連接，得含接頭的核酸片段；

A23.利用生物素標(biāo)記的擴(kuò)增引物對(duì)步驟A22的產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得生物素標(biāo)記的捕獲探針。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的捕獲核酸片段的方法，其特征在于，所述步驟A包括以下步驟：

A31.片段化含待捕獲核酸片段的核酸分子，得片段化產(chǎn)物；

A32.片段化產(chǎn)物與生物素標(biāo)記的接頭元件連接，得生物素標(biāo)記的捕獲探針。

10.根據(jù)權(quán)利要求6或8所述的捕獲核酸片段的方法，其特征在于，所述的接頭元件為分叉接頭。

11.根據(jù)權(quán)利要求7所述的捕獲核酸片段的方法，其特征在于，所述用于特異性擴(kuò)增待捕獲核酸片段的引物對(duì)包括：SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:5和SEQ?ID?NO:6、SEQ?ID?NO:7和SEQ?ID?NO:8、SEQ?ID?NO:9和SEQ?ID?NO:10、SEQ?ID?NO:11和SEQ?ID?NO:12、SEQ?ID?NO:13和SEQ?ID?NO:14、SEQ?ID?NO:15和SEQ?ID?NO:16、SEQ?ID?NO:17和SEQ?ID?NO:18、SEQ?ID?NO:19和SEQ?ID?NO:20中的至少一對(duì)。