[發明專利]一種甲型肝炎病毒的提純方法

有效

• 申請號: 201210280517.1
• 申請日: 2012-08-08
• 公開（公告）號: CN102807972A
• 公開（公告）日: 2012-12-05
• 發明（設計）人: 張現臣;魏文進;黃秋香;劉雨;包建偉;鐘漢斌;王春雨;孟紅彥
• 申請（專利權）人: 深圳康泰生物制品股份有限公司
• 主分類號: C12N7/02
• 分類號: C12N7/02;A61K39/29;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.一種甲型肝炎病毒的提純方法，包括以下步驟：

1）甲型肝炎病毒細胞培養液超聲破碎，離心去除細胞碎片，收集上清液；

2）氯仿抽提上清液，得到粗制病毒液；

3）將粗制病毒液超濾濃縮，緩沖鹽溶液洗脫超濾膜；

4）疏水層析純化濃縮病毒液；

5）病毒液的檢測與收集。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1）所述甲型肝炎病毒細胞培養液超聲破碎是將抗原滴度達到1：256-1024的甲型肝炎病毒細胞培養液在冰浴條件下超聲破碎。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述超聲破碎使用的超聲破碎儀功率為500-1500w，輸出功率為50%-95%，破碎次數為4-6次。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1）的離心方法為3500-4500r/min，離心5min-10min。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2）氯仿抽提是將氯仿按體積比為1:1-3加入上清液振搖，然后3500-4500r/min離心后吸取上層水相，如此重復抽提4-6次；將蛋白相和氯仿再用抽提緩沖液抽提并吸取上層水相，合并上層水相得到粗制病毒液。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述的抽提緩沖液為120mM?NaCl或6.2mM?PBS。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟3）超濾濃縮的倍數為10-30倍，超濾膜的截留分子量為50-100KD。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟3）緩沖鹽溶液為2-4mol/L的PBS溶液，pH7.2。

9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟4）層析方法為：每次上樣量為1000-2000ml，上樣緩沖液為2mol/L?PBS，pH7.2，洗脫緩沖液為0.5mol/L?PBS，pH7.2，流速為15ml/min。

10.權利要求1-9任一所述的方法在制備甲型肝炎疫苗中的應用。