[發(fā)明專利]一種水產(chǎn)品中氯霉素化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210280415.X
• 申請日: 2012-08-09
• 公開（公告）號: CN103575878A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳建軍;金偉;崔海容;馮漢利;李娟娟;余浩;曾憲東
• 申請（專利權(quán)）人: 湖北出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心;武漢百仕康生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種氯霉素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析試劑盒，其特征是由(1)包被有包被抗原的微孔板，(2)氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品，(3)酶標(biāo)抗體工作液，(4)緩沖液，(5)洗滌液，(6)發(fā)光液組成。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征是包被抗原(1)是由氯霉素小分子和載體蛋白(牛血清白蛋白BSA)通過EDC(碳二亞胺)法偶聯(lián)制成的完全抗原。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征是酶標(biāo)氯霉素抗體(3)該酶標(biāo)抗體是將辣根過氧化物酶通過過碘酸鈉法與氯霉素抗體連接，形成酶標(biāo)抗體。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述試劑盒，其特征是包被有包被抗原的微孔板(1)，其特征為48孔、96孔或其他孔數(shù)的可拆卸或不可拆卸微孔板。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述試劑盒，其特征是包被有包被抗原的微孔板，其制備：將包被抗原以包被緩沖液稀釋，每孔加入50-300μL置于4℃冰箱包被。次日將包被抗原的微孔板取出洗滌后每孔加50-300μL封閉液，置于25-40℃水浴鍋封閉0.5-2小時后再洗滌，拍干，用真空密封在4℃下保存。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述試劑盒，其特征是發(fā)光液(6)，該發(fā)光液包含T緩沖液、魯米諾、對羥基苯丙烯酸、過硼酸鈉。

7.一種用權(quán)利要求1所述的試劑盒檢測氯霉素的方法，其特征是向微孔板中加入氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液或處理好的樣品和酶標(biāo)抗體，溫育洗滌后加入發(fā)光液檢測發(fā)光值，以加入氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品的發(fā)光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以加入被測樣品的發(fā)光值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算被測樣品中氯霉素的含量。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測氯霉素的方法，其特征是操作為：向包被好的酶標(biāo)板中每孔加入標(biāo)準(zhǔn)溶液或處理好的樣品和酶標(biāo)物，在25-40℃下溫育15分鐘。洗滌后，每孔加入發(fā)光液1-5分鐘后在化學(xué)發(fā)光檢測儀上檢測。以所得的標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)光值，除以第一個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的發(fā)光值再乘以100，得到抑制率(B/B₀)，以抑制率為縱坐標(biāo)，氯霉素濃度的對數(shù)為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，每一個樣品的濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出。

9.根據(jù)權(quán)利要求7、8所述的檢測氯霉素的方法，其特征是樣品處理：

魚蝦樣品：取10g去除脂肪的樣品勻漿化，稱量3g勻漿化的樣品與6mL乙酸乙酯混合10min，4000g離心5min，轉(zhuǎn)移2mL乙酸乙酯上層到干凈的玻璃管中，50℃溫和氮?dú)饬髡舭l(fā)乙酸乙酯，脂肪殘留物溶于1mL正己烷混勻1min，并加入1mL樣品稀釋液。渦旋混合1min，4000g離心分離5min。(注：如下層乳化，可將試管置于80℃水浴中5min左右，并再次進(jìn)行離心)，棄去上層，吸取100μL下層溶液用于檢測。最終檢測結(jié)果應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)1。