[發明專利]一種2’-FANA類氟代寡核苷酸的合成方法

無效

• 申請號: 201210279505.7
• 申請日: 2012-08-08
• 公開（公告）號: CN103570784A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 安徽瑞賽生化科技有限公司
• 主分類號: C07H21/00
• 分類號: C07H21/00;C07H1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物有機合成技術領域，涉及一種2’-FANA類制備氟代寡核苷酸（FANA）的生物有機合成方法。?

背景技術

腫瘤是威脅人類健康的重大疾病。它的形成是由多基因突變累積與相互作用形成導致的。從1998年發展起來的RNA干擾技術，是由siRNA介導的高度特異的轉錄后基因沉默效應，具有高效性，特異性的特點（Andrew?Fire,?et?al.??Nature,?1998,391:?806-811）?，F已發展成為一種成熟的抑制靶基因表達的有力工具，尤其是對于由基因轉錄水平增加而導致的基因過度表達是一種強有力的抑制手段（Xia?Haibin,?et?al.??Nature,?2002,?20:1006-1010）。RNA干擾應用于腫瘤治療目前主要的障礙是轉運途徑的問題，目前解決這個問題的最有效的途徑有兩個：1、化學修飾siRNA，使其具備更好的核糖核酸酶抗性，從而提高其生物穩定性，增加其生物利用度；2、應用病毒載體表達shRNA，從而使被感染細胞內能夠較為容易的表達shRNA。其它的如脂質體等轉染試劑幫助siRNA或shRNA表達載體轉運也是很有希望的途徑（Arndt?B.?Cancer?cell,?2002,?2(3):?167-168）。siRNA在體內環境的生物穩定性很差。實驗表明，沒有經過修飾的siRNA在血清中的半衰期小于15分鐘，這極大的限制了siRNA在臨床治療中的應用。為解決該項技術的缺陷，目前研究已經證實，經過化學修飾后的siRNA能在保留原有生物活性的基礎之上，進一步提高體內的穩定性，其在血清中的半衰期可以增加數十倍，具備了臨床治療應用的潛力（Elbashir?SM,?et?al.??Nature.2001;?411:?494-498）。?

文獻報道的化學修飾RNA方法較多，主要分為核糖核酸的末端和化學基團修飾、核苷酸的骨架修飾或2’-、4’-位修飾、堿基修飾、組合修飾等等。硫代磷酸的修飾是第一代的核酸修飾方法，其產物抗核酸酶解能力較強,但是有較大的非特異毒性。核糖的2位羥基的烷基修飾是第二代的核酸修飾法，其重要代表是2’-O-methyl?(OMe)和2’-O-methoxy-ethyl?(MOE)?RNA。其產物在性能上雖有一定改善,但非特異毒性依然存在。在這個基礎上，發展了許多各式各樣的修飾方法，主要有Peptide?nucleic?acids?(PNAs)、N3’-P5’?phosphoroamidates?(NPs)、’-Deoxy-2’-fluoro-b?

-D-arabino?nucleic?acid?(FANA)、Locked?nucleic?acid?(LNA)、Morpholino?oligonucleotides?(MF)、Cyclohexene?nucleic?acids?(CeNA)、Tricyclo-DNA?(tcDNA)等方法，稱之為第三代的核酸修飾法（Xiaolan?Chen,?et?al?.??Drug?discovery?today?targets,?2005,10?(8):?587-593）。

FANA（2’-Deoxy-2’-fluoro-b-D-arabino?nucleic?acid，2’-脫氧-2’-氟-b-D-阿拉伯糖核苷酸）修飾的RNA是指由FANA替代核糖組成寡核苷酸的骨架形成的RNA類似物。?

近幾年的文獻已證實，FANA修飾是極少數的能夠增強siRNA血清中半衰期的同時還能增強siRNA的活性的方法之一（Chiu?YL?,?et?al?.?RNA,?2003,9(9):1034?1048）。但目前尚未見到該方法修飾的siRNA應用于腫瘤治療的報道。采用FANA修飾法對siRNA進行恰當的修飾，既能保留甚至增強其生物學活性，又能顯著增加其生物學穩定性，是一種很有前景的siRNA修飾方案。本發明提供了一種用于制備siRNA的氟代寡核苷酸的合成方法。?

發明內容

本發明通過下述方法實現的：本發明涉及一種2’-FANA類制備氟代寡核苷酸（FANA）的合成方法如下:?

①?以1-乙?；?2，3，5-三-O-苯甲?；?β-D-呋喃核糖為原料，二氯甲烷為溶劑，在酸性條件下，經重排反應，制備獲得，以1，3，5-三-O-苯甲?；?2-羥基-β-D-呋喃核糖，收率約70%。