[發明專利]水產養殖鲇魚雜種的RAG2分子標記RFLP鑒定方法

有效

• 申請號: 201210278244.7
• 申請日: 2012-08-07
• 公開（公告）號: CN102758021A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發明（設計）人: 宋昭彬;郭睿;楊世勇;張修月
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 成都天嘉專利事務所(普通合伙) 51211
• 代理人: 趙麗

1.水產養殖鲇魚雜種的RAG2分子標記RFLP鑒定方法，其特征在于：應用PCR擴增后的RAG2基因片段在南方鲇與鲇之間存在的種間序列差異，采用合適的限制性內切酶，分析鑒定南方鲇、鲇及其雜交子代。

2.根據權利要求1所述的水產養殖鲇魚雜種的RAG2分子標記RFLP鑒定方法，其特征在于：包括以下步驟：

A?分別取南方鲇、鲇及其雜交子代樣本，提取基因組DNA；

B?分別以南方鲇、鲇及其雜交子代樣本的基因組DNA為模板，在RAG2基因片段特定引物的引導下進行PCR擴增；?

C分別對南方鲇、鲇及其雜交子代樣本的RAG2基因片段進行限制性內切酶?StuⅠ和XhoⅠ的酶切反應；

D?利用瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR-RFLP產物，在一個泳道上同時出現南方鲇和鲇的兩條基因條帶，即為南方鲇和鲇的雜交種。

3.根據權利要求2所述的水產養殖鲇魚雜種的RAG2分子標記RFLP鑒定方法，其特征在于：所述的步驟B中的RAG2基因片段特定引物，其堿基序列為：

正向引物（SEQID?NO:3）?5’-TTAGTGTTGACAATCGTGG-3’；

反向引物（SEQID?NO:4）?5’-TCTTCTAGAGGTGCAGAATC-3’。

4.根據權利要求3所述的水產養殖鲇魚雜種的RAG2分子標記RFLP鑒定方法，其特征在于：所述的RAG2基因片段特定引物，所擴增出的南方鲇的基因片段的核苷酸序列為SEQID?NO:1。

5.根據權利要求3所述的水產養殖鲇魚雜種的RAG2分子標記RFLP鑒定方法，其特征在于：所述的RAG2基因片段特定引物，所擴增出的鲇的基因片段的核苷酸序列為SEQID?NO:2。

6.根據權利要求2所述的水產養殖鲇魚雜種的RAG2分子標記RFLP鑒定方法，其特征在于：所述的步驟C中，限制性內切酶?StuⅠ的酶切步驟為：使用PCR儀進行酶切，反應體系為15?μL，5?μL?RAG2-PCR擴增產物，加入1?μL酶切反應緩沖液，0.5?μL限制性核酸內切酶?StuⅠ，酶切位點為AGG↓CCT，酶切反應參數為37℃、5~6?min，酶的失活參數為80℃、10~11?min。

7.根據權利要求2所述的水產養殖鲇魚雜種的RAG2分子標記RFLP鑒定方法，其特征在于：所述的步驟C中，限制性內切酶XhoⅠ的酶切步驟為：使用PCR儀進行酶切，反應體系為15?μL，5?μL?RAG2-PCR擴增產物，加入1?μL酶切反應緩沖液，0.5?μL限制性核酸內切酶?XhoⅠ，酶切位點為C↓TCGAG，酶切反應參數為37℃、5~6?min，酶的失活參數為80℃、5~6?min。