[發明專利]一種酵母葡聚糖中非水溶性葡聚糖含量的檢測方法

有效

• 申請號: 201210278074.2
• 申請日: 2012-08-07
• 公開（公告）號: CN102818779A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發明（設計）人: 張心青;楊傳倫;王秀芝;徐澤平;高洪奎
• 申請（專利權）人: 黃河三角洲京博化工研究院有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 苗峻

1.一種酵母葡聚糖中非水溶性葡聚糖含量的檢測方法，其特征在于：主要步驟包括：順次經過除去堿溶性成分、去除酸溶性成分、濃酸降解和稀酸水解，將非水溶性葡聚糖完全轉化為水溶性葡聚糖，用苯酚-硫酸法測定非水溶性葡聚糖的含量。

2.根據權利要求1所述的酵母葡聚糖中非水溶性葡聚糖含量的檢測方法，其特征在于：具體步驟包括：

（1）除去堿溶性成分

取烘干粉碎的待測多糖樣品，分別稱取20-200mg于3-5個離心杯中，分別加入堿溶液，充分震蕩5-10min，離心5-20min，棄去上清液，如此重復2次；

（2）去除酸溶性成分

向步驟（1）中棄去上清液的3-5個離心杯中，分別加入酸溶液，充分震蕩5-10min，離心5-20min，棄去上清液，如此重復2次；

（3）濃酸降解

將步驟（2）中棄去上清液的3-5個離心杯中的沉淀分別轉移到相應的100mL碘量瓶中，分別向各個碘量瓶加入酸溶液，充分震蕩2-5min，室溫放置20-30min；

（4）稀酸水解

向經步驟（3）酸處理后的3-5個碘量瓶中分別加入40mL-80mL水，接上冷凝管，100℃水解2-6小時，取出，冷水浴中降溫到室溫，分別轉移到100mL容量瓶中，并定容得待測樣品溶液；

（5）苯酚-硫酸法測定非水溶葡聚糖的含量

配制50g/L的苯酚溶液：稱取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀釋至100mL，混勻，置冰箱中保存，備用；

配制葡聚糖標準儲備溶液：精密稱取分子量10000、干燥至恒重的葡聚糖標準品P82?0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混勻，置冰箱中保存；

配制葡聚糖標準溶液：吸取葡聚糖標準儲備溶液1.00mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混勻，置冰箱中保存；

標準曲線繪制：精密吸取葡聚糖標準溶液0，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00mL分別置于25mL比色管中，準確補充水至2.0mL，加入50g/L的苯酚溶液1.0mL，在旋轉混勻器上混勻，小心加入濃硫酸10.0mL，于旋轉混勻器上小心混勻，置沸水浴中煮沸10min，冷卻后用分光光度計在490nm波長處以試劑空白溶液為參比，1cm比色皿測定吸光度值；以葡聚糖的質量濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，得出標準曲線的回歸方程為：y=4.405x-0.0031，R²=0.9997

式中y為葡聚糖的質量濃度，單位為mg/mL，x為吸光度值，R為線性相關系數；

測定非水溶葡聚糖的含量：吸取步驟（4）所得的待測樣品溶液5-25mL，用蒸餾水稀釋至50-500mL，吸取該稀釋液1mL-2mL，分別加入3-5個25mL比色管中，依次加入蒸餾水補至總體積2mL，再分別加入50g/L的苯酚溶液1.0mL，混合均勻后，加入10mL濃硫酸，然后迅速放入沸水浴中10-30min，再用冰水浴迅速冷卻至室溫，搖勻，以空白樣品為參比，在490nm波長下，根據標準曲線得出樣品溶液中非水溶葡聚糖的質量，從而按照下式獲得樣品中非水溶葡聚糖的含量：?

式中：

x—樣品中非水溶葡聚糖的含量；

w₁—測定樣品溶液中非水溶葡聚糖的質量，mg；

m—多糖樣品的質量，mg；

v₁—樣品稀酸水解中定容總體積，mL；

v₂—吸取的待測樣品溶液的體積，mL；

v₃—吸取的待測樣品溶液稀釋后的體積，mL；

v₄—測定用樣品溶液體積，mL。

3.根據權利要求2所述的酵母葡聚糖中非水溶性葡聚糖含量的檢測方法，其特征在于：所述步驟（1）中堿溶液為氫氧化鈉溶液或氫氧化鉀溶液或其混合物。

4.根據權利要求2或3所述的酵母葡聚糖中非水溶性葡聚糖含量的檢測方法，其特征在于：所述步驟（1）中堿溶液的體積為10mL-30mL，濃度為20g/L-100g/L。

5.根據權利要求2所述的酵母葡聚糖中非水溶性葡聚糖含量的檢測方法，其特征在于：所述步驟（2）中酸溶液為鹽酸溶液或硫酸溶液或其混合物。