[發(fā)明專利]大分子活性膠原蛋白的制備方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210276450.4 | 申請日： | 2012-08-06 |
| 公開（公告）號： | CN103571901A | 公開（公告）日： | 2014-02-12 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 郁帥陸;黃榮醒;林琳 | 申請（專利權(quán)）人： | 江蘇奧普萊醫(yī)療用品有限公司 |
| 主分類號： | C12P21/06 | 分類號： | C12P21/06;C07K1/34;C07K1/14 |
| 代理公司： | 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 柏尚春 |
| 地址： | 225600 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 大分子 活性 膠原 蛋白 制備 方法 | ||
1.一種大分子活性膠原蛋白的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
一、魚皮的預(yù)處理
???????選取新鮮魚皮，100重量份，水洗去肉后，加入20-30%?NaCI(0.05M?Tris-HCI，pH7.5)溶液中(1:20-40，w/v)均質(zhì)5-10min，用轉(zhuǎn)速為10000-15000rpm高速冷凍離心機(jī)離心10-25min，取沉淀，重復(fù)上述操作，直到?jīng)]有浮游脂肪和氣泡產(chǎn)生，然后用去離子水清洗；
二、活性膠原蛋白的提取
???????將預(yù)處理后的魚皮加入預(yù)冷的去離子水中（1:50-100，w/v），冰浴，加入乙酸至0.5-1.0M超聲10-25min，超聲波功率300-600W，加入0.1-0.5重量份胃蛋白酶、酸性酶3350和木瓜蛋白酶中的一種或數(shù)種，酶解5-8h，離心，取上清，所得沉淀加去離子水（1:50-100），調(diào)pH值至中性，加入0.1-0.5重量份中性蛋白酶、菠蘿蛋白酶中的一種或兩種，酶解3-6h，離心，取上清，合并兩份上清，得膠原蛋白溶液；
三、活性膠原蛋白溶液的純化
選孔徑為10-50nm的超濾膜濃縮上述膠原蛋白溶液，加入NaCl至終濃度為0.5-1.3M，鹽析過夜，然后離心10-30min，取沉淀，沉淀再次用0.5-1M乙酸溶解后，離心1-2h，取上清，對0.1-0.2M乙酸透析脫鹽，用100-200nm孔徑的超濾膜去除小分子物質(zhì)和多肽，得到濃度為20-50%的大分子活性膠原蛋白溶液。
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