[發(fā)明專利]一種利用重組基因工程菌獲得鏈霉菌胰蛋白酶酶原的方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210274589.5 | 申請日： | 2012-08-03 |
| 公開（公告）號： | CN102851269A | 公開（公告）日： | 2013-01-02 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 陳堅;令楨明;堵國成;康振;李江華 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N9/76 | 分類號： | C12N9/76;C12N15/57;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京匯信合知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11335 | 代理人： | 王秀麗 |
| 地址： | 214122 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 利用 重組 基因工程 獲得 霉菌 胰蛋白酶 方法 | ||
【權(quán)利要求書】：
1.一種利用重組基因工程菌獲得鏈霉菌胰蛋白酶酶原的方法，其特征在于以重組基因工程菌畢赤酵母GS115為種子，活化后按10%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中中，控制發(fā)酵溫度30℃，搖床轉(zhuǎn)速200r/min，發(fā)酵3-4天，所述重組基因工程菌染色體上攜帶有胰蛋白酶酶原的基因。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述胰蛋白酶酶原的基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述基因工程菌的構(gòu)建方法包括如下步驟：
第一步：化學全合成鏈霉菌屬胰蛋白酶酶原基因；
第二步：將第一步得到的類胰蛋白酶酶原基因片段與畢赤酵母常用表達載體pPIC9K雙酶切、連接，得到含有胰蛋白酶酶原基因的重組質(zhì)粒；
第三步：將重組質(zhì)粒電擊轉(zhuǎn)化宿主畢赤酵母GS115，構(gòu)建高效表達胰蛋白酶酶原的組成型畢赤酵母重組菌株。
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