[發明專利]一種雞新城疫、傳染性法氏囊病二聯高免卵黃抗體凍干粉的制備方法無效

申請號：	201210272503.5	申請日：	2012-07-31
公開（公告）號：	CN102743751A	公開（公告）日：	2012-10-24
發明（設計）人：	吳紅云;徐進;哈斯通拉嘎;郭俊清	申請（專利權）人：	鄭州后羿制藥有限公司
主分類號：	A61K39/42	分類號：	A61K39/42;A61K9/19;A61P31/14
代理公司：	鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119	代理人：	牛愛周
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種新城傳染性法氏囊病二聯卵黃抗體干粉制備方法
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種雞新城疫、傳染性法氏囊病二聯高免卵黃抗體凍干粉的制備方法，屬于疾病免疫技術領域。

背景技術

雞新城疫病、雞傳染性法氏囊病是養雞業中常見的疾病，容易大面積爆發從而造成嚴重的經濟損失。其中，雞新城疫（NewCastledisease），由副粘病毒引起的高度接觸性傳染病。又稱亞洲雞瘟或偽雞瘟。常呈急性敗血雞新城疫雞新城疫癥狀。主要特征是呼吸困難、便稀、神經紊亂、粘膜和漿膜出血。死亡率高，對養雞業為害嚴重。1926年首先發現于印度尼西亞，不久又在英國新城發現，世界各國均有流行記載，有強毒株和弱毒株兩類。病毒分為低毒力型（即緩發型）、中等毒力型（即中發型）、強毒力型（即速發型）3型。多數高強度毒力株常屬嗜內臟型新城疫病毒。雞科動物都可患罹本病，家雞最易感，雛雞比成年雞易感性更高。雞傳染性法氏囊病又稱雞傳染性腔上囊病，是由傳染性法氏囊病毒引起的一種急性、接觸傳染性疾病，以法氏囊發炎、壞死、萎縮和法氏囊內淋巴細胞嚴重受損為特征，從而引起雞的免疫機能障礙，干擾各種疫苗的免疫效果，發病率高，幾乎達100%，死亡率低，一般為5%～15%，是目前養禽業最重要的疾病之一。自然條件下，此病只感染雞，所有品種的雞均可感染，但不同品種的雞中，白來航雞比重型品種的雞敏感，肉雞較蛋雞敏感，此病僅發生于2周至開產前的小雞，3～7周齡為發病高峰期。病毒主要隨病雞糞便排出，污染飼料、飲水和環境，使同群雞經消化道、呼吸道和眼結膜等感染；各種用具、人員及昆蟲也可以攜帶病毒，擴散傳播；此病還可經蛋傳遞。目前主要防止方法包括抗病毒藥、中西藥及其制劑、單一病的卵黃抗體及其他生物制劑等，其中卵黃抗體是最有效的治療雞發生病毒病的方法。

發明內容

本發明的目的提供了一種雞新城疫、傳染性法氏囊病二聯高免卵黃抗體凍干粉的制備方法，以針對雞兩種病毒疾病制備的二聯高免卵黃抗體凍干粉制劑，不僅方便運輸、保存，同時減少飼養成本和勞動操作，減少對雞群的刺激，提高養殖經濟效益。

為了實現上述目的，本發明的技術方案采用了一種雞新城疫、傳染性法氏囊病二聯高免卵黃抗體凍干粉的制備方法：將兩種不同的傳染病的病毒株制成相應的疫苗，首次免疫接種0.5mL，二、三次免疫接種1mL，每次間隔5天，兩種疫苗交替進行免疫，第二次免疫后開始檢測抗體效價，達到抗體效價要求時開始收集高免蛋，然后經過一系列物理、化學方法從高免蛋的卵黃中提取抗體，再經過配制加入輔料凍干，得到雞新城疫、傳染性法氏囊病二聯高免卵黃凍干粉制劑。

本發明的雞新城疫、傳染性法氏囊病二聯高免卵黃抗體凍干粉的制備方法，具體包括以下步驟：

1）選出標準毒株制成疫苗，采用每間隔5天對選定的健康雞群免疫，新城疫抗體與法氏囊抗體交替進行，第二次免疫后開始抗體效價檢測，新城疫抗體效價達1：256、法氏囊抗體效價達1：512時，開始收集高免蛋；

2）收集的高免蛋進行清理、消毒，晾干備用；

3）分離高免卵黃，加入等體積的無菌水，攪拌混勻，直到顏色發白為止，得到充分混勻卵黃溶液；攪拌混勻的程度到發白色，這樣卵黃才能破碎徹底，抗體釋放比較完全；

4）步驟3)得到的卵黃溶液放入水浴鍋內加熱30min，然后加入pH為4.9-5.2的預冷酸化水溶液，混勻，靜置沉淀，取上清液，離心20min，15000rpm/min，留上清液；

5）向步驟4）上清液中加入0.8-1.0%體積的辛酸，混勻，靜置，棄去雜質漂浮物；

6）將步驟5）得到上清液離心10min，20000rpm/min，留取上清液，靜置，再用0.45μm的濾膜進行過濾，除去較大的雜質或者雜蛋白，得到卵黃抗體溶液；

7）采用超濾裝置進行超濾濃縮，濃縮到已定好的體積和抗體效價為止；

8）將濃縮好的卵黃溶液加入滅活劑和防腐劑；

9）加入輔料；

10）制定出合理的凍干曲線，凍出完整的卵黃抗體凍干粉。

步驟3）所述無菌水的加入量與卵黃溶液等體積。