[發(fā)明專利]不含異源成分的gM-陰性EHV突變體

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210272159.X
• 申請日: 2003-07-16
• 公開（公告）號: CN102978168A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 安東尼.紐鮑爾;克里斯蒂娜.齊格勒
• 申請（專利權(quán)）人: 貝林格爾.英格海姆維特梅迪卡有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N15/38;A61K39/245;A61K48/00;A61P31/22;C12N15/85;C12R1/93
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105
• 代理人: 岑曉東

此案是申請日為2003年07月16日、中國申請?zhí)枮?00810178863.2、發(fā)明名稱為“不含異源成分的gM-陰性EHV突變體”的發(fā)明申請的分案申請。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及動物健康領(lǐng)域，特別是涉及編碼gM蛋白的基因缺失且不含異源成分(heterologous?element)的馬皰疹病毒(Equine?Herpes?Viruse)(EHV)。本發(fā)明進一步涉及包含所說病毒的藥用組合物及其應(yīng)用，以及預(yù)防和治療EHV感染的方法。本發(fā)明也涉及包含EHV-1和EHV-4病毒的藥用組合物，其中編碼gM蛋白的基因缺失，并且不含有異源成分。

背景技術(shù)

馬皰疹病毒1(EHV-1)，作為α皰疹病毒亞科(Alphaherpesvirinae)的成員，是馬中病毒引起流產(chǎn)的主要原因，它也可引起呼吸和神經(jīng)系統(tǒng)疾病。馬皰疹病毒4(EHV-4)也可引起呼吸系統(tǒng)疾病，流產(chǎn)，或神經(jīng)系統(tǒng)疾病。已經(jīng)鑒定出了兩種類(EHV-1:菌株Ab4p;EHV-4:菌株NS80567)的DNA全序列(Telford,E.A.R.et?al.,1992;Telford,E.A.R.et?al.,1998)。然而，只鑒定出了少數(shù)與EHV毒力和免疫原特性相關(guān)的基因和基因產(chǎn)品。

皰疹病毒的糖蛋白，在病毒感染初期階段，病毒粒子的細胞釋放階段，以及病毒粒子通過與相鄰細胞融合而進行細胞至細胞的直接擴散階段，都扮演了至關(guān)重要的作用。迄今為止，已經(jīng)鑒定出了11種1型單純皰疹病毒(HSV-1)編碼的糖蛋白，它們命名為gB,gC,gD,gE,gG，gH,gl,gJ,gK,gL和gM。缺失了gC,gE,gG，gl,gJ,和gM的HSV-1突變體是活的，顯示這些基因在培養(yǎng)細胞中對病毒復(fù)制是可有可無的。HSV-1和馬皰疹病毒1的核苷酸序列比較顯示，所有的已知HSV-1糖蛋白在EHV-1中都是保守的。按照當(dāng)前的命名法，這些糖蛋白被以它們的HSV-1同源類似物的名字命名。已知EHV-1的gC,gE和gl不是在細胞培養(yǎng)物中生長所必需的，而gB和gD則是病毒在培養(yǎng)細胞中生長所必需的。其它EHV-1糖蛋白對在培養(yǎng)細胞中病毒復(fù)制所起的作用是未知的(Flowers,C.C.et?al.,1992)。轉(zhuǎn)錄和蛋白分析顯示，糖蛋白gB,gC,gD,gG，gH和gK可在EHV-1感染的細胞中表達。糖蛋白gM(由基因UL10表達[Baines,J.D.et?al.,1991;Baines,J.D.et?al.,1993])是唯一報道的非必要糖蛋白，其在所有的皰疹病毒亞家族中是保守的，并且對于人、小鼠巨細胞病毒，以及γ皰疹病毒亞科成員EHV-2，松鼠猴皰疹病毒(herpesvirus?saimiri)，以及EB病毒(Epstein-Barr)有記載。與許多皰疹病毒糖蛋白類似，HSV-1?gM在病毒粒子和感染細胞的膜上出現(xiàn)。只缺失gM的HSV-1突變體在細胞培養(yǎng)系統(tǒng)中的生長滴度，與野生型病毒相比，大約減少了10倍，而且在小鼠模型中顯示出了減少的毒力(Baines,J.D.et?al.,1991;MacLean,C.A.et?al.,1993)。EHV-1gM同源類似物(gp21/22a;本文中稱為EHV-1gM)第一次是被Allen和Yeargan(Allen,G.P.et?al,1987)所記載，認為其是病毒包膜的主要成分。進一步的研究顯示，基因52是與HSV-1UL10同源的基因，編碼450個氨基酸的EHV-1?gM多肽(Pilling,A.et?al.,1994;Telford,E.A.R.et?al.,1992)。EHV-1?gM是一個多聚體疏水蛋白，包含有8個預(yù)測的跨膜區(qū)，據(jù)報道在感染細胞和純化病毒粒子中出現(xiàn)，是Mr為45,000的蛋白(Pilling,A.et?al.,1994;Telford,E.A.R.et?al.,1992)。

為了控制EHV-1的病毒感染，可以采取兩種不同的方法。第一種，開發(fā)修飾的活疫苗(MLVs)，包括廣泛在歐洲和美國中使用的RacH株(Mayr,A.et?al.,1968;Hubert,P.H.et?al.,1996)。第二種，滅活疫苗，以及基于重組表達的病毒糖蛋白亞單位疫苗，如糖蛋白(g)B,C,D,和H，它們可對接下來在模型鼠中EHV-1的感染接種產(chǎn)生部分的保護作用。包含所說糖蛋白的亞單位疫苗，如gB,gC,gD,和gH，只有很弱的抗重復(fù)感染的保護作用(Awan?et?al.,1990,Osterrieder?et?al.,1995,Tewari?et?al.,1994,Stokes?et?al,1996)。

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，提供一種比現(xiàn)有技術(shù)疫苗能更好抗EHV感染的改良疫苗。