[發明專利]彎曲菌分離、鑒定的試劑盒、制備和應用

無效

• 申請號: 201210268442.5
• 申請日: 2012-08-01
• 公開（公告）號: CN102816831A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發明（設計）人: 許學斌;袁政安;金匯明
• 申請（專利權）人: 上海市疾病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/26
• 分類號: C12Q1/26;C12Q1/04
• 代理公司: 上海浦東良風專利代理有限責任公司 31113
• 代理人: 張勁風

1.彎曲菌分離、鑒定的試劑盒，包括：

1）、選擇性增菌液Ⅰ：

基礎成分：胰化酪蛋白胨20.0g，N,N-二羥乙基甘氨酸緩沖液10.0g，氯化鈉5.0g，酵母浸出物?2.5g，瓊脂粉?1.0g，亞硫酸鐵?0.25g，Na₂S₂O₃?0.25g，丙酮酸鈉?0.25g，蒸餾水983.75ml；

堿性高鐵血紅素溶液?6.25ml；

10ml抗生素組合液：氨曲南10mg/L，兩性霉素B2mg/L，萬古霉素10mg/L；

上述組分混合后分裝225ml/瓶備用；

2）、選擇性增菌液Ⅱ：選擇性增菌液Ⅰ分裝9ml/管，備用；

3）、改良卡爾馬里瓊脂平板：成分：

活性炭4.0g，

哥倫比亞瓊脂基礎990.0ml，

抗生素添加劑10ml：丙酮酸鈉50.0mg，放線菌酮50.0mg，頭孢哌酮16.0mg，氯化鐵血紅素16.0mg，萬古霉素10.0mg，

上述組分混合后傾注無菌平板置冰箱中，備用；

4）、哥倫比亞血平板：哥倫比亞血瓊脂基礎950ml：蛋白胨23.0g，瓊脂粉10.0g，氯化鈉5.0g，淀粉1.0g，加蒸餾水950ml煮沸3次后加入50ml無菌脫纖維綿羊血，混勻后傾注無菌平板置冰箱中，備用；

5）、微需氧產氣袋：成分：碳酸氫鈉8.0g，活性炭3.0g，枸櫞酸2.0g，鐵粉7g，無水硫酸銅1.5g，硅藻土10g，均勻干燥脫水后置錫紙袋內，真空封口；

6）、革蘭染色液：革蘭染色液Ⅰ液：結晶紫酒精飽和液10ml和1%草酸銨水溶液90ml的混合液；革蘭染色液Ⅱ液：碘酒；革蘭染色液Ⅲ液：純酒精液；革蘭染色液Ⅳ液：即復紅染液；

7）、氧化酶試劑：成分：質量百分比濃度1%對-氨基-4-甲基苯胺鹽酸鹽水溶液；

8）、馬尿酸紙片和馬尿酸酶反應試劑：所述的馬尿酸酶反應試劑為茚三酮溶液。

2.權利要求1所述試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

1、選擇性增菌液Ⅰ制備：

基礎成分：胰化酪蛋白胨20.0g，N,N-二羥乙基甘氨酸緩沖液10.0g，氯化鈉5.0g，酵母浸出物?2.5g，瓊脂粉?1.0g，亞硫酸鐵?0.25g，Na₂S₂O₃?0.25g，丙酮酸鈉?0.25g，蒸餾水983.75ml；

堿性高鐵血紅素溶液?6.25ml：每100ml配方：高鐵血紅素0.32g，0.15N氫氧化鈉溶液?100ml溶解混勻后，5磅30分鐘，108℃冷卻備用；

10ml抗生素組合：氨曲南10mg/L，兩性霉素B2mg/L，萬古霉素10mg/L

基礎成分經121℃15磅15分鐘滅菌后冷卻至50℃加入高鐵血紅素溶液和抗生素組合液后分裝225ml/瓶備用；

2、選擇性增菌液Ⅱ制備：選擇性增菌液Ⅰ分裝9ml/管，備用；

3、改良卡爾馬里瓊脂平板制備：成分：活性炭4.0g，哥倫比亞瓊脂基礎990.0ml，一起加熱溶解經121℃15磅15分鐘滅菌后冷卻至50℃加入抗生素添加劑10ml，所述的抗生素添加劑由下述組分混合而成：丙酮酸鈉50.0mg，放線菌酮50.0mg，頭孢哌酮16.0mg，氯化鐵血紅素16.0mg，萬古霉素10.0mg，按冷卻至25℃后測量值為標準，調整pH至7.2，傾注無菌平板置冰箱中，備用；

4、哥倫比亞血平板制備：哥倫比亞血瓊脂基礎950ml：蛋白胨23.0g，瓊脂粉10.0g，氯化鈉5.0g，淀粉1.0g，加蒸餾水950ml煮沸3次，按冷卻至25℃后測量值為標準，調整pH至7.3，經121℃15磅15分鐘滅菌后冷卻至50℃加入50ml無菌脫纖維綿羊血，混勻后傾注無菌平板置冰箱中，備用；

5、微需氧產氣袋制備：成分：碳酸氫鈉8.0g，活性炭3.0g，枸櫞酸2.0g，鐵粉7g，無水硫酸銅1.5g，硅藻土10g，均勻干燥脫水后置錫紙袋內，真空封口；

6、革蘭染色液制備：革蘭染色液Ⅰ液：即結晶紫：取結晶紫酒精飽和液10ml，1%草酸銨水溶液90ml，混合均勻即可；革蘭染色液Ⅱ液：即碘酒：取碘化鉀2.0g溶于10ml蒸餾水中，再加碘粒1.0g，充分搖動使之溶解，再加蒸餾水300ml即可，儲存于棕色瓶中備用；革蘭染色液Ⅲ液：純酒精液；革蘭染色液Ⅳ液：即復紅染液：堿性復紅8.16g，溶于質量百分比濃度95%酒精100ml內，取10ml加入質量百分比濃度5%石碳酸水溶液90ml，臨用時再以蒸餾水稀釋10倍或沙黃染色液；

7、氧化酶試劑制備：成分：質量百分比濃度1%對-氨基-4-甲基苯胺鹽酸鹽水溶液；?

8、馬尿酸紙片和馬尿酸酶反應試劑制備：馬尿酸紙片制備方法：馬尿酸鈉1.0g，溶于50ml蒸餾水中，經0.22μm孔徑濾膜加壓過濾后滴加于直徑6.35mm無菌厚紙片中，烘干備用；馬尿酸酶反應試劑：茚三酮溶液：茚三酮3.5g，加50ml丙酮和50ml正丁醇溶解混均后分裝2.5ml于無菌棕色滴瓶中備用。