[發明專利]一種大蒜試管鱗莖的誘導方法

無效

• 申請號: 201210263069.4
• 申請日: 2012-07-27
• 公開（公告）號: CN102792887A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發明（設計）人: 王振英;李轉春;彭愛芳;劉曉穎;范寶莉;陳宏
• 申請（專利權）人: 天津師范大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

技術領域

本發明屬于農業生物工程技術領域，涉及大蒜組織培養與快繁的方法，更具體的說是一種誘導大蒜的試管鱗莖培養基及其快繁的方法。

背景技術

大蒜（Alliumsativum）是無性繁殖植物，由于長期的無性繁殖，大蒜積累了大量的病毒，嚴重影響了大蒜的品質、產量以及商品性。以色列科學家通過低溫誘導、光周期調控和營養控制促使大蒜開花，獲得大蒜種子，通過種子繁殖和改良大蒜品種取得了可喜進展，然而，由于大蒜種子的生物量小，獲得實生苗的數量有限，加上種子獲得要求條件高，所以通過大蒜開花接種子來繁殖大蒜仍然處于探索階段。到目前為止，大蒜的快繁、脫毒、種質創新主要靠離體培養的方法。大蒜離體脫毒快繁主要有三種途徑：

第一是愈傷組織途徑：大蒜通過外植體（莖尖、莖盤等）誘導愈傷組織培養，繼而誘導再生苗是一種重要快繁手段，但愈傷組織途徑快繁，由于需要經過細胞脫分化和再分化過程獲得組織培養苗，大量的遺傳變異和組培苗難以移栽成活嚴重影響了人們對這種方法在生產實踐中的推廣；

第二，離體誘導叢生苗途徑：該方法不通過愈傷組織誘導培養，而是直接用大蒜外植體誘導不定芽，不定芽培養成叢生苗，叢生苗通過誘導生根形成試管苗，該方法避免了細胞脫分化和再分化對大蒜遺傳變異的影響，對大蒜種質保持有重要的積極作用（徐培文等,山東農業科學,1998）。上述兩種方法制約大蒜繁殖系數的瓶頸問題是試管苗移栽成活率不高（宋淑敏等，黑龍江八一農墾大學學報，2012）；

第三是利用氣生鱗莖和試管鱗莖途徑：

(1）氣生鱗莖繁殖法：研究表明，有些工作者用大蒜的氣生鱗莖（天蒜）做種子進行大蒜的脫毒、快繁，取得了一定的進展，且早在1964年吳鵬（1964，中國農業科學）通過精細挑選和合理栽培，實現了氣生鱗莖第一年結出分瓣大蒜。更多的報導是，利用天蒜做種子繁殖大蒜，由于只有成熟的天蒜才能做種子，不成熟或幼嫩的天蒜（確切的說是氣生鱗芽）做種子，因其營養不足，出苗率降低，降低了繁殖效率。同時，為了獲得更多的成熟的、可以用作種子的天蒜，人們不得不讓留天蒜的蒜薹充分生長，這樣，其生長必然會爭奪地蒜的營養，影響地蒜的產量，降低種蒜的收益。張紹文等（中國蔬菜，1994）對大蒜氣生鱗莖利用價值進行研究，用的是成熟的天蒜，用天蒜作播種材料其增殖倍數均在30倍以上，但留天蒜植株的地蒜重量較不留株減產22.6%-33%；

(2）試管鱗莖繁殖法：

由于試管苗（不管是從愈傷組織中還是叢生苗中獲得的）馴化作為微繁殖與大田生產相銜接的關鍵環節，需要非常嚴格的馴化條件和管理操作，馴化過程中試管苗在離體條件下形成的根系往往不能發揮作用，需要發生新根系，導致恢復生長緩慢，死苗率高，而試管鱗莖具有較強的抗逆性，不需馴化即可直接移栽到大田，并且試管鱗莖具有較好的貯藏性，可以不受大田生長季節的限制，所以試管鱗莖的培育為大蒜脫毒種苗商品化生產提供有效途徑（劉高瓊等，南京農業大學學報，1996；萬麗，南京農業大碩士論文，2004；）。張素芝等（2007，山東農業大學學報）建立了大蒜花苞不定芽再生體系，他們用大蒜花苞為外植體，在不同的激素配比條件下（MS+NAA+KT），體外誘導不定芽，平均每個花苞誘導不定芽的個數最多為19.2，在不加激素的培養基上，這些不定芽誘導成試管鱗莖的頻率最高可達82.9%。這種方法有效地利用了大蒜花苞具有誘導不定芽能力強的特點，同時借鑒了前人利用試管鱗莖快繁效率高的優點。

發明內容

本發明的目的在于公開了一種大蒜試管鱗莖的誘導方法，它是按如下的步驟進行:

（1）大蒜花苞采摘及處理

田間種植的大蒜甩辮后7-10天，采摘花苞200個，每個花苞帶15-20cm的假莖，置太陽下晾曬，將花苞平均分成2份，用硫酸紙將帶假莖的花苞包好，外套敞口的塑料保鮮袋；?

（2）低溫誘導氣生鱗芽

將幼嫩大蒜花苞在4-6℃冰箱中低溫誘導30天，待長出氣生鱗芽后將將外衣和假莖去除備用；?

（3）復壯氣生鱗芽

A.以MS培養基為基本培養基，在1L培養基中加a-萘乙酸0.5mg，激動素2.5mg，?蔗糖30g，瓊脂7.5g，定容至1000ml，?pH值調為5.8，在121℃、1.1kg／cm高溫高壓滅菌20min，待滅菌后的培養基冷卻至60℃時，分裝到100ml的培養瓶中，每瓶20ml培養基，把口封好以防染菌，備用；?