[發(fā)明專利]一種近紅外的電致化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210262285.7
• 申請(qǐng)日: 2012-07-26
• 公開（公告）號(hào): CN102749452A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄒桂征;劉淑風(fēng);梁國(guó)棟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 濟(jì)南金迪知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37219
• 代理人: 王緒銀

1.一種近紅外的電致化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法，包括步驟（1）近紅外量子點(diǎn)與二抗的連接、步驟（2）夾心免疫反應(yīng)并制得電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器和步驟（3）用電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器進(jìn)行免疫檢測(cè)：

（1）近紅外量子點(diǎn)與二抗的連接：

將表面帶有羧基的量子點(diǎn)作為標(biāo)記物并分散到含有1-乙基-3-3-二甲基氨丙基碳化二亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺的緩沖溶液中，加入二抗，漩渦混合震蕩均勻，在室溫下反應(yīng)，對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行離心，并用上述緩沖溶液洗滌2-5次，得量子點(diǎn)標(biāo)記的二抗；

（2）夾心免疫反應(yīng)：

首先，將表面枝接有羧基的固體電極在含有1-乙基-3-3-二甲基氨丙基碳化二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺的緩沖溶液中活化后，取含有一抗的緩沖溶液滴加到電極表面，在30-50℃下孵育1-6h，將一抗固定在電極上，并采用3%體積濃度的牛血清白蛋白滴加到電極封閉非特異性吸附的活性位點(diǎn)；其次，取含有不同濃度待測(cè)抗原的緩沖溶液或處理過的病人血清樣品滴涂到電極上，在35-45℃下孵育1-6h，清洗電極；最后，取量子點(diǎn)標(biāo)記的二抗溶液滴加到上述電極上，在35-45℃下孵育1-6h，制得近紅外電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器；

（3）用電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器進(jìn)行免疫檢測(cè)：

將上述近紅外電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器清洗后，在含有10-100mmol/L2-N-二丁氨基乙醇或三丙胺的緩沖溶液中進(jìn)行電致化學(xué)發(fā)光測(cè)試；先利用夾心免疫分析方法，測(cè)定一系列標(biāo)準(zhǔn)濃度抗原的電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)，然后確定抗原標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，最后利用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定待測(cè)樣品中抗原的濃度。

2.如權(quán)利要求1所述的一種近紅外的電致化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法，其特征在于：步驟（1）和（2）中的量子點(diǎn)為熒光輻射在700-1100nm的量子點(diǎn)。

3.如權(quán)利要求2所述的一種近紅外的電致化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法，其特征在于：步驟（1）和（2）中的量子點(diǎn)為熒光輻射在780nm的碲化鎘量子點(diǎn)。

4.如權(quán)利要求1所述的一種近紅外的電致化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法，其特征在于：步驟（1）、（2）和（3）中所述的緩沖溶液為磷酸緩沖液、Tris~HCl緩沖溶液或B~R緩沖溶液中的一種。

5.如權(quán)利要求1所述的一種近紅外的電致化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法，其特征在于：步驟（2）中固體電極為金電極、鉑電極或玻碳電極中的一種。

6.如權(quán)利要求1所述的一種近紅外的電致化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法，其特征在于：步驟（2）和（3）中所述的抗原為甲胎蛋白抗原、癌胚抗原、糖類抗原125、糖類抗原15-3、糖類抗原72-4、糖類抗原19-9、前列腺特異性抗原、游離前列腺特異抗原、愛滋病抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗原、甲狀腺球蛋白、肌鈣蛋白T抗原和肌紅蛋白抗原中的一種；步驟（2）中所述的一抗為與抗原對(duì)應(yīng)的單克隆抗體；步驟（1）和（2）中所述的二抗為所述抗原與一抗對(duì)應(yīng)的單克隆二抗。

7.如權(quán)利要求6所述的一種近紅外的電致化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法，其特征在于：步驟（2）和（3）中所述的抗原為甲胎蛋白抗原，步驟（2）中所述一抗為甲胎蛋白單克隆抗體，步驟（1）和（2）中所述二抗為甲胎蛋白二抗。