[發(fā)明專利]肺炎支原體耐藥菌株的PCR-SNP檢測方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210262158.7 | 申請日： | 2012-07-26 |
| 公開（公告）號： | CN102747166A | 公開（公告）日： | 2012-10-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 孫紅妹;李少麗;薛冠華;趙漢青;馮燕玲 | 申請（專利權(quán)）人： | 首都兒科研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12R1/35 |
| 代理公司： | 北京中偉智信專利商標代理事務(wù)所 11325 | 代理人： | 張岱 |
| 地址： | 100020*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 肺炎 支原體 耐藥 菌株 pcr snp 檢測 方法 | ||
1.一種肺炎支原體耐藥菌株的PCR-SNP檢測方法，其特征在于具體包括以下步驟：
(1)根據(jù)已知的Mp23S?rRNA中的耐藥突變基因位點設(shè)計1條上游引物、1條下游引物和1條特異性引物對其進行特異性擴增，特異性引物是人為在引物的3′端引入一個錯配堿基且3′端末端落在突變位點；
(2)提取待測樣本DNA；
(3)利用上述3條引物、樣本DNA及其它PCR組份構(gòu)建PCR反應(yīng)體系并進行擴增；
(4)對上述PCR產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，判定是否發(fā)生耐藥基因突變。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種肺炎支原體耐藥菌株的PCR-SNP檢測方法，其特征在于所述的步驟(1)中的3條引物為F：5’AGAAGGAGGTTAGCGCAAGCG3’，S：5’TATATTAGGCGCAACGGGACAGA?3’，R：5’CTGGATAACAGTTACCAATTAGAACAGC?3’。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種肺炎支原體耐藥菌株的PCR-SNP檢測方法，其特征在于所述的步驟(3)中的PCR反應(yīng)體系為25μl：10×PCR?reaction?buffer2.5μl，25mM的MgCl2?2μl，2.5mM的dNTPs2μl，10μM上游引物1.0μl，10μM下游引物1.0μl，10μM特異性引物1.5μl，2.5U的Taq?DNA?polymerase1μl，DNA模板3μl、雙蒸水11μl。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種肺炎支原體耐藥菌株的PCR-SNP檢測方法，其特征在于所述的步驟(3)中的PCR擴增條件為預變性94℃5min，接著94℃0.5min，58℃0.5min，72℃1min，30個循環(huán)，最后72℃延伸10min。
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