[發(fā)明專利]一種高活性復合纖維素酶及其制備和在木質(zhì)纖維酶解糖化中的應用方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210260079.2
• 申請日: 2012-07-20
• 公開（公告）號: CN102787104A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發(fā)明（設計）人: 陳介南;詹鵬;張林;王義強;陳石蘭
• 申請（專利權）人: 中南林業(yè)科技大學;長沙聯(lián)美生物科技有限責任公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N9/42;C12P19/14;C12R1/645
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所 43114
• 代理人: 袁靖

1.一種高活性復合纖維素酶的制備方法，其特征在于，所述的復合纖維素酶是由爪哇正青霉ZN-205?CCTCC?NO:M208204生產(chǎn)的β-葡萄糖苷酶與里氏木霉Rut?C-30?ATCC?56765生產(chǎn)的纖維素酶經(jīng)濃縮處理，將濃縮后的酶液進行混合得到的，得到的復合纖維素酶的β-葡萄糖苷酶活/PFA酶活比值為1.4；

所述的爪哇正青霉ZN-205?CCTCC?NO:M208204生產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的過程如下：

挑取一環(huán)爪哇正青霉ZN-205?CCTCC?NO:M208204孢子接種于種子培養(yǎng)基的搖瓶中，搖床上培養(yǎng)作為接種物；按搖瓶裝液量體積的5%，將上述接種物接種于裝有100ml產(chǎn)酶培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，28℃，175rpm條件下培養(yǎng)5天；離心，上清液即為β-葡萄糖苷酶；

所述的爪哇正青霉ZN-205?CCTCC?NO:M208204產(chǎn)酶培養(yǎng)基：初始pH為6.0；微晶纖維素質(zhì)量濃度為2.5%，蛋白胨質(zhì)量濃度0.75%，KH₂PO₄?2g/L，CaCl₂·2H₂O?0.4g/L，MgSO₄·7H₂O?0.02g/L，Mandels微量元素濃縮液1ml/L，1mol/L檸檬酸緩沖液50ml/L；吐溫-80的添加質(zhì)量百分比為0.05%，加水配制成1L；

其中，Mandels微量元素濃縮液：FeSO₄·7H₂O?5g/L，MnSO₄·H₂O?1.6g/L，ZnSO₄·7H₂O?1.4g/L，CoCl₂·6H₂O?3.7g/L，加水配制成1L；

1mol/L檸檬酸緩沖液：C₆H₈O₇·H₂O?210g，H₂O?750ml，加NaOH?78g，冷卻后測pH為4.2，加水至1000ml，pH為4.45。

2.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的爪哇正青霉ZN-205?CCTCCNO:M208204種子培養(yǎng)基：葡萄糖20g/L，蛋白胨1g/L，Mandels營養(yǎng)鹽濃縮液100ml/L，Mandels微量元素濃縮液1ml/L，1M檸檬酸緩沖液50ml/L，加水配制成1L；

其中，Mandels營養(yǎng)鹽濃縮液：(NH₄)₂SO₄?14g/L，(NH₄)₂CO₃?3g/L，KH₂PO₄?20g/L，CaCl₂·2H₂O?4g/L，MgSO₄·7H₂O?0.2g/L，加水配制成1L；

Mandels微量元素濃縮液：FeSO₄·7H₂O?5g/L，MnSO₄·H₂O?1.6g/L，ZnSO₄·7H₂O?1.4g/L，CoCl₂·6H₂O?3.7g/L，加水配制成1L；

1mol/L檸檬酸緩沖液：C₆H₈O₇·H₂O?210g，H₂O?750ml，加NaOH?78g，冷卻后測pH為4.2，加水至1000ml，pH為4.45。

3.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，從保存的爪哇正青霉ZN-205?CCTCC?NO:M208204固體平板培養(yǎng)基中挑取一環(huán)孢子接種于裝液50ml種子培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，28℃，200rpm搖床上培養(yǎng)2.5~3天作為接種物。

4.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的爪哇正青霉ZN-205?CCTCC?NO:M208204經(jīng)過產(chǎn)酶培養(yǎng)基培養(yǎng)后在4000rpm下，離心10min，得到上清液。