[發(fā)明專(zhuān)利]包埋-交聯(lián)磷脂酶A1聚集體用于大豆毛油脫膠的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210256605.8
• 申請(qǐng)日: 2012-07-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102776065A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于殿宇;江連洲;胡立志;王立琦;周曉丹;張春艷;宋云花;劉鑫;鄒小雨;李萬(wàn)振;宋鵬;王玥
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C11B3/00
• 分類(lèi)號(hào): C11B3/00;C11B3/04
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及用包埋-交聯(lián)磷脂酶A₁聚集體對(duì)大豆毛油進(jìn)行脫膠的方法。

背景技術(shù)

交聯(lián)酶聚集體(?CLEAs)，是一類(lèi)新型的固定化酶技術(shù)，具有制備簡(jiǎn)單、酶活回收率高、操作和保存穩(wěn)定性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛運(yùn)用于固定化酶的制備中。近年來(lái)，CLEAs技術(shù)與材料學(xué)、印跡工程、介質(zhì)工程、反應(yīng)工程學(xué)等相結(jié)合取得了一系列新進(jìn)展，包括載體固定化CLEAs、包埋CLEAs、印跡法CLEAs、多酶CLEAs、CLEAs膜漿反應(yīng)器等,?在手性分子拆分與合成、抗生素生產(chǎn)等領(lǐng)域取得了一些成果。有些酶的CLEAs相對(duì)游離酶的酶活回收率竟超過(guò)100%，某些脂酶的交聯(lián)酶聚集體活性甚至可提高10倍以上。

大豆油含有3%左右的磷脂，它們對(duì)油脂制品風(fēng)味性及在使用時(shí)與油的起泡、出腦等現(xiàn)象均有直接關(guān)系，脫膠工藝中欲脫除的磷脂大體可分為水化磷脂與非水化磷脂。可水化磷脂是比較容易除掉的,而非水化磷脂用直接水化法難以除去。經(jīng)過(guò)幾十年的發(fā)展，人們已經(jīng)推出了傳統(tǒng)水化脫膠、簡(jiǎn)單酸法脫膠、Special脫膠和酶脫膠法等方法，現(xiàn)有主要的大豆毛油脫膠方法是酶脫膠法，酶脫膠法以其良好的經(jīng)濟(jì)環(huán)保性能而受到越來(lái)越多的重視，酶脫膠法可將油中磷含量降到15mg/Kg以下，但是使用游離酶進(jìn)行脫膠存在一些問(wèn)題，如溫度和pH不易控制，影響脫膠效果等。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明是針對(duì)固定化磷脂酶A₁活性低等問(wèn)題，而提出的用包埋-交聯(lián)酶聚集體來(lái)固定化磷脂酶A₁，并將該包埋-交聯(lián)磷脂酶A₁聚集體用于大豆毛油脫膠的方法。包埋-交聯(lián)磷脂酶A₁聚集體用于大豆毛油脫膠的方法，其特征在于用包埋-交聯(lián)磷脂酶A₁聚集體對(duì)大豆毛油進(jìn)行脫膠通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)：一、包埋-交聯(lián)磷脂酶A₁聚集體的制備：將1mL酶加入到pH值為5.0的磷酸二氫鈉與檸檬酸緩沖液中，調(diào)節(jié)酶液濃度為0.02～0.07g/mL，在0℃下緩慢加入飽和度為65～90%的乙醇，在pH為3～8的條件下進(jìn)行沉淀反應(yīng)時(shí)間30min，持續(xù)攪拌，從而保證酶聚集體顆粒均勻，然后于10000r/min離心，收集沉淀；交聯(lián)磷脂酶A₁聚集體的制備及包埋過(guò)程：向聚集體懸浮液中加入體積濃度為0.2%戊二醛，攪拌進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)4h，離心去除上清液，用緩沖液沖洗交聯(lián)酶聚集體數(shù)次，直到洗液中檢測(cè)不到任何的活性，收集沉淀用磷酸鹽緩沖液懸浮；在質(zhì)量濃度1%的20mL海藻酸鈉溶液中加入上述酶聚集體1mL，攪拌均勻，靜止5min后，用滅菌后的5mL注射器吸入上述混合液，以約5滴/s注入濃度0.1～0.35mol/L的CaCl₂溶液中制成微膠囊，將形成的微膠囊在4℃的CaCl₂溶液中放置一段時(shí)間使其進(jìn)一步硬化。然后抽濾得到硬化的微膠囊，用無(wú)菌生理鹽水洗滌3～5次，以洗去表面的CaCl₂，然后進(jìn)行冷凍干燥，得到包埋-交聯(lián)磷脂酶A₁聚集體；二、取大豆毛油先經(jīng)水化脫膠法去除大豆毛油中的水化磷脂，然后向經(jīng)過(guò)處理的大豆毛油中加入質(zhì)量濃度為35～50%、質(zhì)量為大豆毛油0.5～2%的檸檬酸溶液并以500～1500r/min的速度攪拌5～20min，再向經(jīng)過(guò)處理的大豆毛油中添加質(zhì)量濃度為4%的NaOH溶液并不斷進(jìn)行攪拌直至大豆毛油的pH值在4.0～6.0之間，停止添加NaOH溶液；三、在40～60℃條件下向調(diào)整好pH值的大豆毛油中加入為調(diào)整好pH值的大豆毛油質(zhì)量的0.1～0.5%的包埋-交聯(lián)磷脂酶A₁聚集體；四、對(duì)加入包埋-交聯(lián)磷脂酶A₁聚集體的大豆毛油以50～100r/min的速度攪拌1～10h，然后對(duì)加入包埋-交聯(lián)磷脂酶A₁聚集體的大豆毛油以5000～8000r/min的速度離心1～5min，去除重相中的雜質(zhì)，即實(shí)現(xiàn)用包埋-交聯(lián)磷脂酶A₁聚集體對(duì)大豆毛油進(jìn)行脫膠的工藝。

本發(fā)明精煉大豆毛油的方法中包埋-交聯(lián)磷脂酶A₁聚集體的耐熱性得到提高，可以在較寬的pH范圍內(nèi)保持較高的活性，對(duì)反應(yīng)環(huán)境的敏感性降低，使得操作條件更容易控制和實(shí)施。包埋-交聯(lián)磷脂酶A₁聚集體可連續(xù)反應(yīng)20h以上，還可以進(jìn)行回收重復(fù)利用，其脫膠效率比現(xiàn)有方法提高了5～25%，經(jīng)濟(jì)效益增加1～3%，可進(jìn)行大規(guī)模工業(yè)操作。

具體實(shí)施方式