[發明專利]檢測藥物對人肝細胞色素P450抑制作用的方法

無效

• 申請號: 201210255174.3
• 申請日: 2012-07-23
• 公開（公告）號: CN102816830A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發明（設計）人: 郭澄;韓永龍;李丹;余奇;萬麗麗
• 申請（專利權）人: 上海市第六人民醫院
• 主分類號: C12Q1/26
• 分類號: C12Q1/26
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 劉懿

技術領域

本發明涉及一種醫藥檢測技術，尤其涉及一種檢測藥物對人細胞色素P450（或其亞型）抑制作用的方法。

背景技術

藥物相互作用一般分為藥動學相互作用和藥效學相互作用。藥動學相互作用可發生在吸收、分布、代謝、排泄4個階段，其中代謝性相互作用發生率最高，約占藥動學相互作用的40%，具有非常重要的臨床意義。藥物代謝的主要場所是肝臟，肝臟進行生物轉化則依賴于微粒體中的多種酶系，其中最重要的是細胞色素P450混合功能氧化酶（簡稱CYP450）。

細胞色素P450是人體最重要的藥物代謝酶，主要分布于肝臟，參與內源性物質（如類固醇激素、花生四烯酸等）和外源性物質（如藥物、環境致癌物等）的生物轉化，藥物在人體內的許多代謝動力學特征，如藥物半衰期、肝臟首過效應、藥物相互作用、清除率和生物利用度等均和參與其代謝的細胞色素P450有關。細胞色素P450又被稱為肝微粒體酶，其包括多種亞型，其中參與藥物代謝的亞型主要有CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4等。

CYP450可受遺傳、年齡、機體狀態、營養、疾病、吸煙、飲酒等各種因素的影響，尤其藥物能夠明顯影響藥酶的活性。代謝性藥物相互作用在藥品不良反應中占有很大比例，但是，目前由于對用藥者還不能普遍地開展相關基因遺傳多態性檢測，用基因芯片檢定整個人類基因尋找藥效相關的多態性點位的做法也不切實際，為減輕或避免代謝性藥物相互作用的發生，最簡便易行的方法是合理選用藥物，目前，代謝性藥物相互作用已成為申報新藥的必備項目，因此，考察藥物對人細胞色素P450的抑制作用，進行前瞻性的早期預防，可避免藥物相互作用引起的毒副作用或療效降低，對于藥物篩選、臨床指導用藥等方面至關重要。

發明內容

本發明提供了一種檢測藥物對人肝細胞色素P450抑制作用的方法，通過將探針藥物、測試藥物與含有所述人細胞色素P450的微粒體共同孵育后，檢測探針藥物的代謝產物，可有效的檢測藥物對人細胞色素P450的抑制作用，為工業上藥物的研發、篩選、和臨床上用藥指導提供一種便利的方法。

本發明所述檢測藥物對人肝細胞色素P450抑制作用的方法，步驟包括：

步驟1，選擇人細胞色素P450的探針藥物，將測試藥物、探針藥物與含所述人細胞色素P450的微粒體共同孵育；

步驟2，孵育結束后，檢測探針藥物在其特異性亞酶的作用下轉化生成代謝產物的量，代謝產物生成量越大，則測試藥物對所述人細胞色素P450抑制作用越小。

本發明所述的方法中，以未加測試藥物組酶的活性為100%，然后檢測加入測試藥物后生成代謝產物的量，與未加測試藥物組進行對比。

優選地，檢測加入濃度梯度組所述測試藥物后探針藥物的代謝產物的量。

本發明上述的方法中，還可以包括步驟3，將加入濃度梯度組測試藥物后測得的探針藥物代謝產物生成速率與測試藥物濃度之間按照非線性回歸作圖，和/或計算半數抑制濃度IC₅₀；IC₅₀值越小代表抑制作用越強。

本發明所述的人細胞色素P450可以是其任意亞型（特異性酶），人細胞色素P450亞型優選自CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4中的任意一種或其任意組合。

本發明所述含人細胞色素P450的微粒體優選為人肝微粒體。

本發明上述的方法中，所述亞型CYP1A2的探針藥物為非那西丁、CYP2C9的探針藥物為雙氯芬酸、CYP2C19的探針藥物為s-(+)美芬妥英、CYP2D6的探針藥物為右美沙芬、CYP3A4的探針藥物為咪達唑侖和睪酮中的任意一種或其混合物。

其中，所述探針藥物的代謝產物可以是一種或幾種，并且優選為檢測如下代謝產物：非那西丁的代謝產物包括對乙酰氨基酚、雙氯芬酸的代謝產物包括4-羥基雙氯芬酸、s-(+)美芬妥英的代謝產物包括4-羥基美芬妥英、右美沙芬的代謝產物包括去甲右美沙芬（右啡烷）、咪達唑侖的代謝產物包括1′-羥基咪達唑侖、和睪酮的代謝產物包括6β-羥基睪酮。

本發明上述方法中，所述孵育體系優選為：終體積為150μl的肝微粒體體外孵育體系包括微粒體、pH值為7.4的磷酸緩沖液、MgCl₂、探針藥物和測試藥物。

其中，微粒體蛋白濃度優選為0.01~1mg/ml，更優選為0.02~0.8mg/ml，更優選為0.05~0.5mg/ml，如0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg//ml。