[發(fā)明專利]一種檢測EGFR蛋白的試劑盒及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210253713.X
• 申請日: 2012-07-23
• 公開（公告）號: CN103575901A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐海偉;李勇;胡慶鋒;常立峻;陳秀發(fā)
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州長光華醫(yī)生物試劑有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/76;G01N33/531
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種檢測EGFR蛋白的試劑盒及其制備方法，結(jié)合了生物素-親和素免疫放大技術(shù)和化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)。

背景技術(shù)

表皮生長因子受體(Epidermal?Growth?Factor?Receptor；EGFR)是表皮生長因子(EGF)細(xì)胞增殖和信號傳導(dǎo)的受體。EGFR屬于ErbB受體家族的一種，該家族包括EGFR(ErbB-1)，HER2/c-neu(ErbB-2)，Her3(ErbB-3)和Her4(ErbB-4)。EGFR也被稱作HER1、ErbB1。EGFR是一種糖蛋白，屬于酪氨酸激酶型受體，細(xì)胞膜貫通，分子量170kDa。在科研和生產(chǎn)過程中，需要測定溶液中EGFR蛋白含量變化，來監(jiān)控實(shí)驗(yàn)條件和監(jiān)控生產(chǎn)過程。

目前EGFR蛋白測定方法有膠體金免疫層析(GICA)；蛋白質(zhì)印跡(WB)；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，化學(xué)發(fā)光法免疫分析(CLIA)；GICA、ELISA、WB的優(yōu)點(diǎn)是相對成本低廉，缺點(diǎn)是靈敏度低，EGFR蛋白含量少的情況下檢測不出，CLIA檢測靈敏度比上述方法高，但還是不能滿足科研上對EGFR蛋白超微量檢測的需要。為了適應(yīng)科研和生產(chǎn)上對檢測靈敏度的更高要求，需要對化學(xué)發(fā)光技術(shù)進(jìn)行創(chuàng)新。

1977年，Halmann將具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測定技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)結(jié)合起來，建立了化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA)。經(jīng)過幾十年的發(fā)展。目前根據(jù)標(biāo)記物的不同，化學(xué)發(fā)光免疫分析可分以下四個類型：(1)以辣根過氧化物酶(HRP)為標(biāo)記物的酶促化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)。該系統(tǒng)的發(fā)光底物為魯米諾及其衍生物，在氧化劑存在下，HRP催化魯米諾及其衍生物發(fā)光，波長425nm。苯酚類化合物可增強(qiáng)其發(fā)光強(qiáng)度；(2)以堿性磷酸酶為標(biāo)記物的酶促化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)。該系統(tǒng)的發(fā)光底物為1，2一二氧環(huán)乙烷衍生物(或稱金剛烷衍生物)。例如AMPPD，CSPD，CDP-Star，Lumi-phos480，Lumiphos-530等。表面活性劑會增強(qiáng)并延長其發(fā)光強(qiáng)度，發(fā)光波長470nm；(3)以吖啶酯類為標(biāo)記物的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)。該系統(tǒng)采用直接標(biāo)記吖啶酯類發(fā)光劑，吖啶酯類發(fā)光劑在堿性H₂O₂作用下直接發(fā)光，波長430nm處吖啶酯類發(fā)光系統(tǒng)發(fā)光強(qiáng)度高；(4)以三聯(lián)吡啶釕[Ru(bpy)₃]²⁺為標(biāo)記物的電化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)。是通過施加一定的電壓進(jìn)行電化學(xué)反應(yīng)，在電極表面產(chǎn)生電生物質(zhì)，然后電生物質(zhì)與體系中三丙胺(TPA)之間通過電子傳遞形成激發(fā)態(tài)，之后激發(fā)態(tài)的能量以光的形式釋放出來.在波長350～420nm處發(fā)光強(qiáng)度高。

1982年，Ikarlyama等以氯化血紅素代替辣根過氧化酶(HRP)，用碳二亞胺法將其標(biāo)記在人體血清白蛋白(HSA)上，結(jié)合酶免疫分析技術(shù)，對HSA的化學(xué)發(fā)光免疫測試進(jìn)行了初步探討。他們這一開創(chuàng)性的研究，為金屬卟啉在酶免疫分析中的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

1984年，Hara等將鐵卟啉配合物標(biāo)記于HSA抗體上用于檢測HSA，并將這一體系應(yīng)用于分析化學(xué)中。

1992年，Adam等對鐵卟啉和錳卟啉的催化機(jī)理進(jìn)行的研究，并與辣根過氧化酶的催化發(fā)光效應(yīng)進(jìn)行了比較。

1993年，Motsenbocker等用光敏劑和金屬卟啉標(biāo)記抗體進(jìn)行免疫檢測。

1994年，慈云祥等課題組對于金屬卟啉催化劑替代辣根過氧化酶催化化學(xué)發(fā)光反應(yīng)也進(jìn)行了一些探索。

2006年，Komagoe等卟啉誘導(dǎo)的光學(xué)生成過氧化氫的測定，用魯米諾發(fā)光法：在水溶液中與卟啉聚集的一個結(jié)構(gòu)活性關(guān)系進(jìn)行研究。

2006年，Rana等電化學(xué)產(chǎn)生過氧化氫和卟啉化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行了嘗試。

2006年，李春艷等四苯基卟啉鋅摻雜8-羥基喹啉鋁與四苯基聯(lián)苯二胺的電致發(fā)光性能進(jìn)行了研究。

2007年，劉波等發(fā)光材料四苯基卟啉及其金屬配合物的合成及性能進(jìn)行了研究。

2008年，吳俊等卟啉摻雜MEH-PPV的發(fā)光性能進(jìn)行了探討。

2011年，D?Wu等新型化學(xué)發(fā)光流動注射分析減少其對魯米諾-間-四(3-甲氧基-4-羥基)苯基卟啉錳催化過氧化氫的反應(yīng)進(jìn)行了研究。

2012年，Kazemi等對動力學(xué)化學(xué)發(fā)光錳(III)-四(4-磺酸)卟啉魯米諾過氧化氫體系的人和牛血清白蛋白的影響進(jìn)行了研究探索。