[發(fā)明專利]用于檢測ROS1基因融合突變的引物、探針及檢測試劑盒

有效

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• 申請日: 2012-07-18
• 公開（公告）號: CN102776286A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發(fā)明（設計）人: 張海龍;江風閣;羅捷敏;阮力;鄭立謀
• 申請（專利權）人: 廈門艾德生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 廈門市首創(chuàng)君合專利事務所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭

技術領域

本發(fā)明涉及生物技術領域，具體地涉及一種用于檢測ROS1基因融合突變的引物、探針及檢測試劑盒。

背景技術

肺癌是世界范圍內最常見的惡性腫瘤，發(fā)病率和死亡率居各癌癥之首。每年全世界有超過130萬的患者死于肺癌。在我國肺癌死亡率為30.83/10萬,肺癌已經成為我國發(fā)病率和死亡率第一位的惡性腫瘤。（Orras?JM,Fernandez?E,Gonzalez?JR,et?al.Lung?cancer?mortality?in?European?regions(1955-1997).Ann?Oncol,2003,14(1):159）。

在發(fā)達國家肺癌患者的5年生存率可以達到20%左右，而我國肺癌患者的5年生存率僅為13%，其主要原因是大多數肺癌由于缺乏高靈敏的基因突變檢測和確診技術，從而使患者無法及時接受科學的治療方案,進而使患者錯失了治療的最佳時機。

目前化療仍是肺癌主要治療手段，然而多數化療會產生較大的毒副作用，不同患者間的化療效果也會有較大差異。隨著腫瘤分子診斷技術的發(fā)展，肺癌的分子靶向治療因其毒副作用低，特異性高，日益成為臨床醫(yī)生首選治療方式。新融合基因ROS1的發(fā)現為肺癌患者提供了新的治療靶點。ROS1是胰島素受體家族的一種受體型酪氨酸激酶（Receptor?Tyrosine?Kinase），ROS?1融合首先發(fā)現于惡性膠質瘤中，其融合突變發(fā)生于6號染色體q22區(qū)(Birchmeier?et?al.Proc?Natl?Acad?Sci.87(12):1990;Charest?et?al.Genes?Chromosomes?Cancer.37:58,2003)。ROS1融合包含一個完整的酪氨酸激酶區(qū)域，其融合突變會導致細胞下游信號通路的激活，從而影響細胞的生長，增殖和分化。最新的研究表明ROS1是一種新的腫瘤驅動突變基因，其融合在非小細胞肺癌中被定為一種新的分子亞型。

臨床研究顯示小分子靶向藥物Crizotinib（克里唑蒂尼，Pfizer）可以特異作用于ROS1基因融合突變，通過抑制ROS1酪氨酸激酶區(qū)域的活性，阻斷其下游異常信號通路，從而抑制腫瘤細胞的生長。因此，檢測ROS1融合突變狀態(tài)是指導靶向藥物Crizotinib用藥的前提，在化療之前通過高靈敏的檢測方法檢測ROS1融合基因突變對于提高肺癌患者的生存率，延長生存期、避免過度化療、提高生存質量有著重要意義。

目前，可以臨床上檢測融合基因突變的檢測方法主要為實時熒光PCR方法和直接測序法。然而，直接測序的靈敏度低，檢測靈敏度只有20-30%；檢測操作復雜，效率低，通常要1-2天才可出檢測結果。因而，直接測序法無法滿足臨床檢測實際的需求，臨床迫切需要開發(fā)一種快速融合基因檢測方法，以實現采用快速的檢測方法對融合突變進行同時檢測。

目前，還沒有ROS1融合基因突變的檢測方法和檢測試劑盒，本發(fā)明首次開發(fā)一種快速、操作簡便的ROS1融合基因突變檢測試劑盒及檢測方法。本檢測方法可以一次同時檢測ROS1基因產生的4種融合突變，檢測靈敏度高，檢測時間只需90分鐘即可完成，同時具備了靈敏度高，廉價快速，操作簡單等優(yōu)點，可以滿足臨床快速檢測的實際需求。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種用于ROS1基因融合突變檢測引物和探針，或與其有同一性核苷酸序列，該檢測試劑盒包含以下引物及探針序列：

表1.ROS1融合突變引物和探針核苷酸序列

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SR-M1???SL-RO-M1-R1??????CCCTTCTAGTAATTTGGGAATGCCTGG???????????????SEQ?ID?NO：2

SR-M2???SL-RO-M2-R1??????CCAACTATAATAGTAAGTATGAAACTTGTTTCTGGTATCC??SEQ?ID?NO：3

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