[發(fā)明專利]用于檢測ROS1基因融合突變的引物、探針及檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210249654.9
• 申請日: 2012-07-18
• 公開（公告）號: CN102776286A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張海龍;江風(fēng)閣;羅捷敏;阮力;鄭立謀
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門艾德生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 廈門市首創(chuàng)君合專利事務(wù)所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭

1.用于檢測ROS1融合基因突變的引物、探針，其特征在于，包括以下序列：SEQ?ID?NO?1-SEQID?NO?8。

2.用于檢測ROS1融合基因突變的試劑盒，其特征在于，包括以下序列：SEQ?ID?NO?1-SEQID?NO?8。

3.如權(quán)利要求2所述的檢測ROS1融合基因突變的檢測試劑盒，其特征在于：包括如下的熒光PCR的反應(yīng)體系。

4.如權(quán)利要求2所述的檢測ROS1融合基因突變的檢測試劑盒，其使用方法包括以下步驟：

(1)提取檢測樣本中的RNA，檢測樣本包括新鮮病理組織、石蠟包埋組織或胸腔液組織中的RNA；

(2)RNA反轉(zhuǎn)錄cDNA，配制實時熒光PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系；

(3)根據(jù)熒光PCR擴(kuò)增儀顯示的Ct值判斷檢測結(jié)果：檢測反應(yīng)體系的FAM和HEX熒光強(qiáng)度，以FAM達(dá)到設(shè)定的閾值時所需要的循環(huán)次數(shù)Ct值作為陰陽性判定標(biāo)準(zhǔn)，Ct值大于等于30：陰性；Ct值小于30：陽性。

5.如權(quán)利要求4所述的檢測ROS1融合基因突變的檢測試劑盒，其特征在于，mRNA反轉(zhuǎn)錄cDNA的反應(yīng)體系為。

6.如權(quán)利要求4所述的檢測ROS1融合基因突變的檢測試劑盒，其特征在于，RNA反轉(zhuǎn)錄cDNA包括以下操作步驟：

（a）取逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)混合液18μl，M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶1μl，加入無菌離心管中，混勻。

（b）加入待測樣品RNA?6μl，RNA總量在0.1~5μg范圍內(nèi),補(bǔ)水至25μl。

（c）42℃保溫1個小時。

（d）95℃保溫5分鐘后冰上冷卻，得到cDNA模板。