[發明專利]包括魚精蛋白和基因物質的納米顆粒的制備方法

有效

• 申請號: 201210248240.4
• 申請日: 2012-07-18
• 公開（公告）號: CN102764442A
• 公開（公告）日: 2012-11-07
• 發明（設計）人: 袁偉恩;金拓;吳飛;葛雪梅;張奇昕;蔡云鵬;段詩悅
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K47/42;A61K47/36;A61K47/34;A61K9/14;C08G81/00;C08B37/02;C08G63/08;C08G63/91
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 胡晶

1.一種包括魚精蛋白和基因物質的納米顆粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）以PEG為連續相制備親水相系統；

2）將嵌段高分子、魚精蛋白和基因物質加入步驟1）所制備的親水相系統中，攪拌或搖動，形成納米顆粒；

3）用透析袋透析除去所述納米顆粒水相中留存的PEG，即可制得包括魚精蛋白和基因物質的納米顆粒。

2.如權利要求1所述的一種包括魚精蛋白和基因物質的納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述親水相系統中PEG的濃度為0.1~20wt%。

3.如權利要求1所述的一種包括魚精蛋白和基因物質的納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述基因物質與所述魚精蛋白的質量之和與所述嵌段高分子質量之比為1：0.1~1000，所述基因物質與所述魚精蛋白的質量比為0.1~100：1。

4.如權利要求1所述的一種包括魚精蛋白和基因物質的納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述透析袋的截留分子量為5000~20000Da，透析時間為6~72h。

5.如權利要求1所述的一種包括魚精蛋白和基因物質的納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述嵌段高分子包括依次連接的第一嵌段、第二嵌段和第三嵌段，所述第一嵌段和所述第三嵌段為親水嵌段，所述第二嵌段為疏水嵌段。

6.如權利要求5所述的一種包括魚精蛋白和基因物質的納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述第一嵌段可選自PEG或PEO。

7.如權利要求5所述的一種包括魚精蛋白和基因物質的納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述第二嵌段可選自聚乳酸、聚乙交酯、聚乙交酯-丙交酯共聚物或聚己內酯中的一種。

8.如權利要求5所述的一種包括魚精蛋白和基因物質的納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述第三嵌段包括蛋白親和作用力強的高分子，所述蛋白親和作用力強的高分子選自葡聚糖、麥芽糖或殼聚糖中的一種。

9.如權利要求5所述的一種包括魚精蛋白和基因物質的納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述嵌段高分子還包括靶向基團或熒光分子，所述靶向基團或所述熒光分子與所述第一嵌段連接。

10.如權利要求9所述的一種包括魚精蛋白和基因物質的納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述靶向基團可選自蛋白、多肽、抗體或小分子靶向基團的一種或幾種；所述蛋白可選自轉鐵蛋白或去唾液酸糖蛋白；所述多肽可選自RGD或胰島素；所述小分子靶向基團可選自葉酸、生物素或半乳糖的一種。

11.如權利要求9所述的一種包括魚精蛋白和基因物質的納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述熒光分子可選自羅丹明、FITC、NBD、cy5.5或FAM的一種。

12.如權利要求1所述的一種包括魚精蛋白和基因物質的納米顆粒的制備方法，其特征在于，在步驟2）中，可將所述魚精蛋白與所述基因物質形成復合物后再加入步驟1）所制備的親水相系統中。

13.如權利要求1所述的一種包括魚精蛋白和基因物質的納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述基因物質包括DNA或RNA。

14.如權利要求1所述的一種包括魚精蛋白和基因物質的納米顆粒的制備方法，其特征在于，在步驟2）中，攪拌或搖動的時間為0.5~72h。

15.如權利要求1所述的一種包括魚精蛋白和基因物質的納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述嵌段高分子的合成方法包括以下步驟：

1）以mPEG-COOH為引發劑，在Sn(oct)₂的催化下，在80~140℃條件下于無水甲苯中引發開環聚合，加入己內酯，反應進行10~72h，合成PEG₄₅-PCL₃₀嵌段；

2）將葡聚糖與乙二胺按照1:（1~50）的摩爾比投料，即稱取葡聚糖,乙二胺,溶解于2~50mL的DMSO中，混合物在0~80℃油浴中反應2~10天，每天加入0~50mg氰基硼氫化鈉；反應結束后，加入大量甲醇沉淀，過濾，再加水溶解，甲醇沉淀，反復三次，最后將產物于室溫下真空干燥，得到淡黃色還原氨化的DEX-EDA;

3）將DEX-EDA的氨基與mPEG₄₅-PCL₃₀-COOH的羧基進行反應，稱取DEX-EDA，加入1~10倍摩爾量的PEG-PCL，溶解于1~50mL的DMSO中，加入0~50倍摩爾量的三乙胺，攪拌1~60min后，加入0~50倍摩爾量的2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯，在0~90℃下反應2~48h；反應結束后，加入乙醚沉淀，減壓抽濾，產物加入超純水，溶解后，用截留分子量為1000~20000的透析袋透析除去雜質與未反應的反應物，于-20~-200℃預凍，低溫凍干，得到白色粉末產物。