[發明專利]快速獲得葡萄松散型愈傷組織及其長期繼代保持的方法

無效

• 申請號: 201210246117.9
• 申請日: 2012-07-16
• 公開（公告）號: CN102763593A
• 公開（公告）日: 2012-11-07
• 發明（設計）人: 賴呈純;范麗華;謝鴻根;余亞白
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院農業工程技術研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 福州市鼓樓區京華專利事務所(普通合伙) 35212
• 代理人: 宋連梅

1.一種快速獲得葡萄松散型愈傷組織的方法，其特征在于：該方法包括如下步驟：

（1）葡萄無菌株系的獲得：選取經預處理后的當年生無病葡萄枝條的帶節莖段，之后將所選取的帶節莖段接種到附加0.1mg/L?NAA的1/2MS培養基上誘導產生葡萄無菌株系；其中預處理包含清洗、風干表面水分，并殺菌消毒；

（2）啟動培養：取步驟（1）所獲得的葡萄無菌株系的小苗，切取0.5cm莖段或切取0.5cm×0.5cm見方大小的葉片作為外植體，接著將該外植體接種至誘導愈傷組織的培養基中，并將該培養置基于培養室中培養，7天后可見愈傷組織形成，25~30天后長成初代愈傷組織；

（3）制備葡萄松散型愈傷組織：將步驟（2）培養得到的初代愈傷組織轉接到繼代增殖培養基中，并將該繼代增殖培養基置于培養室中進行繼代增殖培養，以獲得葡萄松散型愈傷組織；

其中，步驟（2）與步驟（3）中所述培養室中的條件均為：溫度設置23~25℃，光照強度1500~2000lx，每天光照12h。

2.根據權利要求1所述的快速獲得葡萄松散型愈傷組織的方法，其特征在于：步驟（2）中所述誘導愈傷組織的培養基為：MS+BA?2.0mg/L+NAA?0.2mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉6g/L。

3.根據權利要求1所述的快速獲得葡萄松散型愈傷組織的方法，其特征在于：步驟（3）中所述繼代增殖培養基為：MS+2,4-D?1.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉6g/L。

4.一種葡萄松散型愈傷組織長期繼代保持的方法，其特征在于：其操作如下：取權利要求1所獲得的葡萄松散型愈傷組織，并接于第一種培養基中繼代保持至少2代后，轉接到第二種培養基中繼代保持1代，如此反復交替繼代培養，即可長期繼代保持葡萄松散型愈傷組織，且繼代保持時的該第一種培養基、第二種培養基均置于培養室中進行；其中，所述第一種培養基為：MS+2,4-D?1.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉6g/L；所述第二種培養基為：MS+2,4-D?1.0mg/L+KT?0.5mg/L+AgNO₃?5.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉6g/L；所述培養室中的條件為：溫度設置23~25℃，光照強度1500~2000lx，每天光照12h。