[發(fā)明專利]一種快速測定植物多糖及糖甙的化學(xué)發(fā)光分析法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210245583.5
• 申請日: 2012-07-16
• 公開（公告）號(hào): CN103543144A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 符波;唐卿;唐凱;李新圃
• 申請（專利權(quán)）人: 符波;唐卿;上海復(fù)博實(shí)驗(yàn)室裝備有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/76
• 分類號(hào): G01N21/76;G01N1/34
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• 代理人: 暫無信息

1.一種快速測定植物多糖及糖甙的化學(xué)發(fā)光分析法，其特征在于采用Luminol-H₂O₂-Co(II)化學(xué)發(fā)光體系進(jìn)行間接測定的方法主要有以下步驟：

①用溶劑法定量提取植物粗粉中的多糖及糖甙，提取多糖時(shí)用溶劑法等除去蛋白質(zhì)等干擾物質(zhì)，提取糖甙時(shí)用溶劑法熱提冷析法反復(fù)處理除去單糖等水溶性干擾物質(zhì)；提取物用活性碳脫色重結(jié)晶法純化過濾后，濾液定容后作為試液。

②取小量試液分別加入一定量的苯酚及濃硫酸，水浴加熱水解完全后冷卻至室溫，稀釋后加入一定量的NaOH試液和H₂O₂試液，稀釋、定容。

③在發(fā)光分析儀的試樣管中，分別通入Luminol試液和CoCl₂試液，注射管內(nèi)通入試液，打開活塞，把試液通入反應(yīng)池，記錄反應(yīng)的化學(xué)發(fā)光信號(hào)。

④根據(jù)實(shí)驗(yàn)所測葡萄糖液標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的回歸方程為：A＝86.37·C+6.43(式中A為發(fā)光強(qiáng)度，C為標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，回歸系數(shù)γ＝0.9651)，計(jì)算試液濃度再換算成相當(dāng)于植物粗粉的多糖及糖甙的重量百分含量。

2.如權(quán)利要求書1所述的方法，其特征在于：多糖及糖甙的提取溶劑與植物原料的物料比在25∶1到50∶1范圍內(nèi)，提取采用熱浸提或煮提，提取3-6次，每次2-3小時(shí)，浸提溫度為50℃-100℃，浸提3-6次；或采用超生提取等其它現(xiàn)有技術(shù)進(jìn)行提取。

3.如權(quán)利要求書1所述的方法，其特征在于：提取多糖的溶劑可選擇50℃以上的熱水或沸水，其純化方法可選擇溶劑萃取法或Sevag透析法或熱提法、活性碳吸附法或凝膠過濾法，其中溶劑萃取法中的溶劑可以是80-90％(V/V)乙醇或甲醇、三氟三氯乙烷、氯仿-戊醇或丁醇(4∶1)混合溶劑；活性炭粉用量與提取液比0.1-3∶100(V/V)；凝膠過濾法選用葡聚糖凝膠Sephendex?G-75至G-200的葡聚糖凝膠。

4.如權(quán)利要求書1所述的方法，其特征在于：提取糖甙的溶劑可選擇水、5-95％(醇/水V/V)乙醇或甲醇、異丙醇、正丁醇、戊醇、丙酮等種的一種、兩種或三種，其純化方法可用上述溶劑反復(fù)熱溶冷析1-3次，再熱溶解定容，其中優(yōu)選的純化溶劑是水及80-95％(醇/水V/V)乙醇或甲醇。

5.如權(quán)利要求書1所述的方法，其特征在于：多糖及糖甙提取液的水解，苯酚及濃硫酸的用量占提取供試液的體積百分比(V/V)分別是：苯酚：30-60％(V/V)，優(yōu)選25-30％，濃硫酸：5-30％，優(yōu)選10-20％；提取液加入濃硫酸后應(yīng)室溫放置不少于10分鐘；加熱水解的溫度40℃-80℃；水解時(shí)間10-60分鐘；水解后需加入與水解所用的濃硫酸等量的NaOH試液。

6.如權(quán)利要求書1所述的方法，其特征在于：多糖及糖甙的提取液可配成0.1-0.5mg/ml的供試液進(jìn)行測定，相應(yīng)的Luminol-H₂O₂-Co(II)化學(xué)發(fā)光體系中所用的Luminol分析液濃度為0.8-5x10^-3mol/L，其制備方法是：取0.8-5x10^-2mol/L的Luminol-NaOH儲(chǔ)備液用pH大于9的堿性緩沖溶液稀釋，配成pH?9-10的1-5x10^-3mol/L的Luminol分析液，此溶液避光保存的時(shí)間不超過7天；該體系使用的Co(II)可選擇CoSO4或赤礬(CoSO4·7H2O)、Co(NO3)或Co(NO3)2·6H2O、CoCO₃或CoCl₂及其水合物中的一種配成濃度為4-20mg/ml、pH值為1-5的酸性溶液，其中優(yōu)選的是用CoCl₂制備及其水合物制備成pH值1-5的CoCl₂試液；該體系中的H₂O₂加入量與提取植物原料的體積重量比應(yīng)為3∶1-1∶0.5(ml/g)，優(yōu)選的用量比是：1∶1。

7.如權(quán)利要求書1所述的方法，其特征在于：標(biāo)準(zhǔn)曲線測定采用的單糖標(biāo)準(zhǔn)品可選擇葡萄糖、鼠李糖、半乳糖及甘露糖等中的一種，優(yōu)選的是葡萄糖。