[發明專利]一種豬肺炎支原體多重組抗原ELISA檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201210244908.8
• 申請日: 2012-07-13
• 公開（公告）號: CN102735851A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 劉茂軍;杜改梅;邵國青;韋艷娜;馮志新;白方方;熊祺琰
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

1.一種豬肺炎支原體多重組抗原ELISA檢測試劑盒，其特征在于，試劑盒中設有：多重組抗原包被的ELISA板，酶結合物工作液，陽性對照血清，陰性對照血清，樣品稀釋液，二抗稀釋液，10×濃縮洗滌液，顯色液A，顯色液B和終止液；其中所述的多重組抗原為豬肺炎支原體蛋白P36、豬肺炎支原體蛋白P46、豬肺炎支原體蛋白P97R1和豬肺炎支原體蛋白DnaK。

2.根據權利要求1所述的豬肺炎支原體多重組抗原ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述的多重組抗原包被的ELISA板按如下方法制備得到：使用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為包被液，將豬肺炎支原體蛋白P36、P46、P97R1和DnaK作為抗原分別以0.5-2μg/ml、5-10μg/ml、5-10μg/ml和5-10μg/ml的包被濃度等體積混合，進行包板，每個樣孔100μL混合抗原，置濕盒，37℃孵育1h，4℃過夜，甩干包被液，用PBST洗滌3次，3-5min/次，加入封閉液10g/L酪蛋白PBS，200μl/孔，置濕盒，37℃孵育1h，甩干，加50g/L蔗糖水溶液37℃孵育1h，甩干后抽空封裝，置2-8℃保存。

3.根據權利要求1所述的豬肺炎支原體多重組抗原ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述的酶結合物工作液為辣根過氧化物酶標記的羊抗豬IgG抗體。

4.根據權利要求1所述的豬肺炎支原體多重組抗原ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述的陽性對照血清為豬肺炎支原體間接血凝和IDEXX公司的ELISA檢測試劑盒檢測為陽性的豬血清；所述的陰性對照血清為豬肺炎支原體間接血凝和IDEXX公司的ELISA檢測試劑盒檢測為陰性的豬血清。

5.根據權利要求1所述的豬肺炎支原體多重組抗原ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述的樣品稀釋液和二抗稀釋液均按如下方法制備得到：氯化鈉8.0g，KH₂PO₄?0.3g，Na₂HPO₄.12H₂O?5.33g，KCl?0.2g加ddH₂O至900ml，加入10g酪蛋白后充分溶解后，調整pH至7.2-7.4，加入0.5mL?Tween-20和0.1-0.5g硫柳汞，加ddH₂O定容至1000mL。

6.根據權利要求1所述的豬肺炎支原體多重組抗原ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述的10×濃縮洗滌液為10×PBST，即含有5mL/L?Tween-20和0.1-0.5g/L硫柳汞的10×PBS。

7.根據權利要求1所述的豬肺炎支原體多重組抗原ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述的顯色液A按如下方法配制：Na₂HPO₄?14.6g，檸檬酸9.33g，過氧化氫脲0.52g，加ddH₂O至1000ml，調至pH5.0～5.4；所述的顯色液B按如下方法配制：TMB200mg，無水乙醇100ml，加ddH₂O定容至1000ml；顯色液A與B按如下方法配制工作液：底物液A與B液1:1(V:V)混合使用，混勻。

8.根據權利要求1所述的豬肺炎支原體多重組抗原ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述的終止液為2mol/L的硫酸溶液。