[發明專利]間充質干細胞及其在抗HIV-1中的應用

有效

• 申請號: 201210243763.X
• 申請日: 2012-07-16
• 公開（公告）號: CN102719397A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 劉擁軍;朱德琳;李福彬;牟浩;王立華
• 申請（專利權）人: 天津和澤干細胞科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/02;A61K35/44;A61K38/18;A61K38/38;A61P37/02;A61P5/00;A61P31/18;A61K31/727
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技術領域

本發明涉及干細胞治療領域，具體地說是一種間充質干細胞免疫調節劑，其主要成分是分泌表達角質形成細胞生長因子的間充質干細胞，可用于HIV-1感染的治療。

背景技術

間充質干細胞（Mesenchymal?Stem?Cells，MSCs）是間質組織來源的具有亞全能分化潛能干細胞，既有調節外周免疫系統的功能，也能修復受損的中樞免疫系統，在免疫系統的發生和功能的維持中起著至關重要的作用。在自身免疫性疾病中，MSCs注射到體內后，不僅能夠遷移到受傷組織，抑制前炎癥因子的釋放，促進受傷細胞的存活，誘導外周免疫耐受，降低異常的免疫反應，更能夠修復受損的胸腺組織，從而減少自身反應性T細胞的產生，阻止疾病的進展。

角質形成細胞生長因子（keratinocyte?growth?factor，KGF）是Rubin?等（1989）從胚胎肺成纖維細胞培養上清中發現的，為FGF?家族成員，即FGF-7。KGF?由間質細胞產生，通過旁分泌機制分泌，與上皮細胞上的特異性受體相結合，與上皮創傷愈合、胚胎發育、腫瘤形成與發展及免疫重建關系密切。

KGF在同種異體造血干細胞移植、自體造血干細胞移植及同種骨髓移植中能夠預防移植物抗宿主疾病和保持移植物抗白血病效應，保護胸腺上皮細胞，增強胸腺重建，改善移植后胸腺和外周血T?淋巴細胞重建。KGF促進胸腺生成素生成，增加外周幼稚CD4⁺?T淋巴細胞和T淋巴細胞依賴性抗體的數量，誘導胸腺上皮細胞（thymic?epithelial?cells，TECs）數目增加和胸腺內IL-7生成，重組皮質和髓質結構。KGF誘導體內幼稚TECs擴增、成熟和促進晚期各型細胞分化的信號途徑，包括p53和NF-κB途徑，導致與TECs?功能和T淋巴細胞發育有關的靶基因轉錄，包括BMP-2、BMP-4、Wnt5b和Wnt10b。應用KGF?能夠降低細菌活力，抑制細菌生長，改善皮炎和胃腸道炎癥。

在感染HIV-1病毒的患者中，缺乏抗病毒治療時，可導致胸腺細胞增殖、輸出數量和功能等降低。HIV-1可導致胸腺的破壞，降低了T淋巴細胞免疫的重構和功能恢復，而使感染的患者加速了疾病的進程。病毒之所以很難清除，也和病毒對胸腺的破壞，減低了機體對病毒的特異免疫功能有關。以前治療艾滋病的藥物只是針對病毒感染，而不能修復受損的胸腺功能。

發明內容

發明人驚奇地發現，利用發明人獨創的微載體高密度培養技術生產的間充質干細胞能夠分泌表達高濃度的細胞因子KGF。

發明人將上述MSCs輸注到裸鼠體內后，發現萎縮的裸鼠胸腺體積增大，胸腺實質增大，胸腺的組織結構向正常的皮髓質結構發育，同時胸腺內的胸腺細胞增多，并發育為成熟的T淋巴細胞，因此MSCs能夠促進胸腺的發育及其功能的維持。

迄今應用最為廣泛的艾滋病靈長類動物模型是SIVmac或SHIV感染的印度恒河猴模型。發明人的實驗表明，MSCs能夠使感染了SIVmac239病毒的恒河猴體內CD4⁺和CD8⁺T淋巴細胞均回升到一個較高的水平。MSCs聯合PMPA治療HIV-1感染的恒河猴，可降低病毒顆粒體在機體內存在，促進CD4⁺T細胞的增加，提高HIV-1感染者的生存率。

因此，分泌表達KGF的間充質干細胞聯合藥物治療艾滋病，能夠在針對HIV感染的同時，修復受損胸腺的功能，增加成熟T細胞的輸出，此為本發明的優勢所在。故而，間充質干細胞作為一種新型的免疫調節劑，在艾滋病的治療中，通過重建被HIV-1感染的胸腺，增加T細胞向外周血中的輸出，增強特異性T細胞的免疫功能，達到抗病毒的效果，為艾滋病的臨床治療提供了一種有效的新策略。

本發明一方面提供了一種分泌表達高濃度KGF的間充質干細胞，優選地，其為臍帶間充質干細胞。

另一方面，本發明提供了一種制備所述分泌表達高濃度KGF的間充質干細胞的方法，其采用微載體培養系統。

在一個特定的實施方案中，該方法包括以下步驟：

(1)????以1.2×10⁵細胞/ml終體積的接種量將種子細胞接種到培養容器中，其中所述培養容器中包含經DMEM/F-12完全培養液包被的微載體和培養最終體積一半量的經過5%?CO₂，飽和濕度，37?℃培養箱平衡的DMEM/F-12完全培養液；