[發明專利]間充質干細胞及其在抗HIV-1中的應用

有效

• 申請號: 201210243763.X
• 申請日: 2012-07-16
• 公開（公告）號: CN102719397A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 劉擁軍;朱德琳;李福彬;牟浩;王立華
• 申請（專利權）人: 天津和澤干細胞科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/02;A61K35/44;A61K38/18;A61K38/38;A61P37/02;A61P5/00;A61P31/18;A61K31/727
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種分泌表達角質形成細胞生長因子（KGF）的間充質干細胞。

2.根據權利要求1的間充質干細胞，其為臍帶間充質干細胞。

3.一種免疫調節劑，其活性成分包括權利要求1或2的間充質干細胞。

4.根據權利要求3的免疫調節劑，其還含有人血白蛋白和抗聚集劑。

5.根據權利要求4的免疫調節劑，所述抗聚集劑為肝素鈣。

6.權利要求1或2的間充質干細胞的制備方法，其特征在于采用微載體培養系統。

7.根據權利要求6的制備方法，包括以下步驟：

（1）以1.2×10⁵細胞/ml終體積的接種量將種子細胞接種到培養容器中，其中所述培養容器中包含經DMEM/F-12完全培養液包被的微載體和培養最終體積一半量的經過5%?CO₂，飽和濕度，37?℃培養箱平衡的DMEM/F-12完全培養液；

（2）接種后靜置于5%?CO₂，飽和濕度，37?℃培養箱內，每隔30min以35rpm攪拌微載體2min，其中該2min從所有微載體均已懸浮開始計算，如此重復間歇式的攪拌培養持續8h；

（3）間歇式攪拌培養后進行8天的連續攪拌培養，其中攪拌轉速為：第1～5天40rpm，第6～8天60rpm；

（4）接種24小時后，用經過平衡的DMEM/F-12完全培養液將培養容器內培養液補至最終體積；

（5）從接種后的第4天開始，每天吸出40%培養容器中的上清，用經過平衡的新鮮DMEM/F-12完全培養液補足系統中培養液的體積，經過無菌操作所取出的上清收集于無菌容器中，置于-20?℃低溫保存；

（6）培養至第8天后，將培養容器從培養箱中取出，靜置，待微載體全部沉降后，取出上清，并與培養過程中所有取出的上清一并收集于無菌容器中，置于-20℃低溫保存；

（7）加入200mL?D-Hank’s緩沖液對微載體進行清洗，在60rpm的轉速下，攪拌微載體3min，后靜置，吸去緩沖液，如此重復3遍；

（8）待吸去全部緩沖液后，加入1%膠原酶溶液40mL，輕輕晃動培養容器，使微載體與膠原酶溶液混勻，靜置于5%?CO₂，飽和濕度，37℃培養箱內15min；

（9）消化結束后，取出培養瓶，加入100mL?D-Hank’s緩沖液，并用移液管反復輕輕吹打微載體，使細胞全部脫落，靜置5min，待微載體全部沉降后，用移液管吸出上層細胞溶液至離心管中，如此重復3遍；

（10）將離心管于1000rpm離心5min，棄去上清，沉淀即為所述間充質干細胞。

8.權利要求1或2的間充質干細胞在制備促進胸腺發育及其功能維持的藥物中的用途。

9.權利要求1或2的間充質干細胞在制備治療HIV-1感染的藥物中的用途。

10.根據權利要求9的用途，其中所述間充質干細胞通過重建被HIV-1感染的胸腺，增加T淋巴細胞向外周血中的輸出達到抗病毒效果。

11.根據權利要求10的用途，其中所述T淋巴細胞為CD4⁺?T淋巴細胞。

12.根據權利要求9-11任一項的用途，其中所述間充質干細胞與抗HIV病毒藥物（PMPA）聯合使用。