[發(fā)明專利]一種基于微流控芯片的腫瘤細(xì)胞遷移動(dòng)力學(xué)監(jiān)測方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210243148.9
• 申請(qǐng)日: 2012-07-13
• 公開（公告）號(hào): CN102746986A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 秦建華;馬慧朋;許慧;高興華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號(hào): C12M1/34
• 分類號(hào): C12M1/34;C12Q1/02
• 代理公司: 沈陽晨創(chuàng)科技專利代理有限責(zé)任公司 21001
• 代理人: 張晨

1.一種微流控芯片，其特征在于：該微流控芯片主要由細(xì)胞入口池（1），膠原入口池（2），廢液池（3），細(xì)胞培養(yǎng)室（4），細(xì)胞遷移室（5）組成；細(xì)胞培養(yǎng)室（5）上連細(xì)胞入口池（1），細(xì)胞培養(yǎng)室（5）下連廢液池（3），一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)室橫向與三個(gè)細(xì)胞遷移室相連。

2.按照權(quán)利要求1所述的微流控芯片，其特征在于：所述微流控芯片由上下兩層不可逆封接而成，上層材料為可透光透氣的PDMS聚合物，下層材料為濃硫酸煮過的潔凈玻璃。

3.按照權(quán)利要求2所述的微流控芯片，其特征在于：所述微流控芯片的上下兩層分別進(jìn)行紫外過夜照射的滅菌處理，然后等離子體處理30-45s進(jìn)行封接。

4.按照權(quán)利要求1所述的微流控芯片，其特征在于：所述微流控芯片是由高度不同的兩部分組成，（1）、（3）、（4）高度約為（2）和（5）高度的三倍。

5.按照權(quán)利要求4所述的微流控芯片，其特征在于：所述（1）、（3）、（4）高度為210μm，（2）和（5）高度為70μm。

6.一種基于權(quán)利要求1所述的微流控芯片的腫瘤細(xì)胞遷移動(dòng)力學(xué)監(jiān)測方法，其特征在于：方法過程如下：

（1）芯片膠原灌注

用移液器將配制好的膠原工作液加入膠原入口池，將固定芯片的培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱中孵育一段時(shí)間，促使膠原由粘稠狀液體變?yōu)楣麅鰻钅z，凝膠過程結(jié)束后，從細(xì)胞入口池、膠原入口池分別順序加入新鮮的細(xì)胞培養(yǎng)液；

（2）芯片細(xì)胞接種及培養(yǎng)

細(xì)胞消化后，調(diào)整合適的細(xì)胞密度，取10μL細(xì)胞懸液加入細(xì)胞入口池，并迅速從廢液池吸走0.5-2μL細(xì)胞培養(yǎng)液，促使細(xì)胞在重力流的作用下快速、均勻地進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)室；當(dāng)在光學(xué)顯微鏡下觀察到已經(jīng)有部分細(xì)胞流入廢液池，而細(xì)胞培養(yǎng)室中的細(xì)胞也均勻分布時(shí)，立即將芯片豎立，并移入二氧化碳培養(yǎng)箱中放置；豎立方向?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)室朝上，而細(xì)胞遷移室朝下；豎立放置5-20min后，取出觀察，如果細(xì)胞緊貼在細(xì)胞培養(yǎng)室與遷移室的交匯處，說明細(xì)胞接種比較成功；將芯片放平移入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)、隔24h換液一次，并拍照記錄腫瘤細(xì)胞所在位置；

(3)芯片細(xì)胞遷移實(shí)時(shí)監(jiān)測

采用活細(xì)胞工作站CO₂顯微載物臺(tái)培養(yǎng)箱進(jìn)行細(xì)胞長期觀察，開啟儀器，同時(shí)打開空氣、二氧化碳?xì)馄浚{(diào)節(jié)閥門，保證載物臺(tái)培養(yǎng)箱內(nèi)5%的CO₂濃度，調(diào)節(jié)其溫度在37℃，儀器穩(wěn)定后，將固定芯片的培養(yǎng)皿放入載物臺(tái)培養(yǎng)箱，調(diào)節(jié)焦距及拍攝參數(shù)，每隔一定時(shí)間拍照一張，實(shí)時(shí)記錄細(xì)胞運(yùn)動(dòng)位置及形態(tài)改變；細(xì)胞遷移入膠原后蛋白表達(dá)檢測。

7.按照權(quán)利要求6所述的基于微流控芯片的腫瘤細(xì)胞遷移動(dòng)力學(xué)監(jiān)測方法，其特征在于，芯片膠原灌注時(shí)，膠原工作液加入膠原入口池，每孔0.4μL；之后再加1mL?PBS緩沖液于培養(yǎng)皿中。

8.按照權(quán)利要求6所述的基于微流控芯片的腫瘤細(xì)胞遷移動(dòng)力學(xué)監(jiān)測方法，其特征在于，芯片細(xì)胞接種及培養(yǎng)時(shí)，所述細(xì)胞密度為1×10⁶/mL。

9.按照權(quán)利要求6所述的基于微流控芯片的腫瘤細(xì)胞遷移動(dòng)力學(xué)監(jiān)測方法，其特征在于，芯片細(xì)胞遷移實(shí)時(shí)監(jiān)測時(shí)，細(xì)胞實(shí)時(shí)監(jiān)測每隔5-60min拍照一張，具體時(shí)間可依據(jù)細(xì)胞行為改變進(jìn)行調(diào)整。

10.按照權(quán)利要求6所述的基于微流控芯片的腫瘤細(xì)胞遷移動(dòng)力學(xué)監(jiān)測方法，其特征在于，所述的蛋白表達(dá)檢測的方法為細(xì)胞死活標(biāo)記染色、細(xì)胞免疫熒光染色、PCR檢測、蛋白質(zhì)檢測。