[發明專利]一種大黃蟄蟲膠囊指紋圖譜鑒別方法

有效

• 申請號: 201210242321.3
• 申請日: 2012-07-12
• 公開（公告）號: CN102778516A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發明（設計）人: 黃曉蘭;吳惠勤;羅輝泰;趙新勝
• 申請（專利權）人: 廣東盛寧醫藥有限公司;中國廣州分析測試中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/36;G01N30/06
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

技術領域

本發明屬于有機物分析檢測領域，具體涉及一種大黃蟄蟲膠囊指紋圖譜鑒別方法。

背景技術：

大黃蟄蟲膠囊是一種復方中成藥，由多味中藥材組成，化學成分很復雜。其療效是由各種化學成分協調作用的結果，大黃蟄蟲膠囊質量的優劣與藥材中化學成分的構成及其含量密切相關。但目前中國藥典及文獻中對大黃蟄蟲膠囊產品的質量控制標準，僅局限于個別成分的檢測，不能全面反映該產品的特性。

發明內容：

本發明的目的是提供一種大黃蟄蟲膠囊指紋圖譜鑒別方法，利用該鑒別方法可以全面的反映大黃蟄蟲膠囊中主要藥味的主要有效成分，獲得指紋圖譜，用于評價和控制大黃蟄蟲膠囊的質量，可以保證大黃蟄蟲膠囊的質量穩定性、一致性和可控性，從而確保大黃蟄蟲膠囊的安全性和有效性。

本發明通過提取出大黃蟄蟲膠囊中的有效成分，高效液相色譜分離，得到大黃蟄蟲膠囊的指紋圖譜，基本涵蓋了其處方的14種有效成分，能全面評價其產品質量，從而實現了本發明的目的。

本發明的大黃蟄蟲膠囊指紋圖譜鑒別方法，其特征在于，大黃蟄蟲膠囊用體積分數50%的乙醇水溶液提取后，過濾取續濾液作為樣品液，以黃芩苷和大黃酚為對照品，應用高效液相色譜法建立指紋圖譜，高效液相色譜法的色譜條件為：色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，用ECOSIL?C18(250mm×4.6mm，5.0μm)柱為色譜柱；流動相：A為0.1%磷酸水溶液，B為乙腈；梯度洗脫，流速：1.0mL/min；柱溫：35℃，紫外檢測波長是：0~7min，210nm；7~18min，235nm；18~46min，254nm，其中梯度洗脫的程序以如下體積比濃度配置進行：0~8min，19%B；8~33min，19%~50%B；33~38min，50%~85%B；38~40min，85%~90%B；40~42min，90%~100%B；42~44min，100%B；44~45min，100%~19%B，再根據大黃蟄蟲膠囊的指紋圖譜中14個共有特征指紋峰與對照指紋圖譜的相似度，鑒別并評價大黃蟄蟲膠囊產品的真偽和質量。

所述的大黃蟄蟲膠囊用體積分數50%的乙醇水溶液提取優選是將大黃蟄蟲膠囊和體積分數50%的乙醇水溶液按照0.5g：25ml的用量比混合提取。

進一步優選，所述的混合提取是在功率250W，頻率40kHz條件下超聲波處理30分鐘。

所述的對照品是通過以下方法制備的：取黃芩苷和大黃酚，用甲醇溶解，分別配制成每毫升含黃芩苷25μg和大黃酚9μg的標準溶液。

用本發明的方法建立的大黃蟄蟲膠囊指紋圖譜共有14個特征指紋峰，其歸屬為：1號峰為苦杏仁苷，為桃仁或苦杏仁的主要成分；2號峰為芍藥苷，為白芍的主要成分；3號峰為甘草苷、9號峰為甘草酸，均來源于甘草；4號及6號峰來源于大黃；5號峰為黃芩苷、8號峰為黃芩素、7號峰及11號峰均來源于黃芩；10號峰為蘆薈大黃素、12號峰為大黃素、13號峰為大黃酚、14號峰為大黃素甲醚均來源于大黃。各峰的平均保留時間如圖3，具體為：1號峰苦杏仁苷5.3min，2號峰芍藥苷8.5min，3號峰甘草苷13.2min，4號峰16.2min，5號峰黃芩苷20.6min，6號峰23.2min；7號峰24.8min，8號峰黃芩素29.8min，9號峰甘草酸30.6min，10號峰蘆薈大黃素33.4min，11號峰36.2min；12號峰大黃素39.2min，13號峰大黃酚41.4min，14號峰大黃素甲醚42.4min。

本發明相對于現有技術具有如下的優點和效果：

（1）本發明采用體積分數50%的乙醇水溶液作為提取劑，可以兼顧大黃蟄蟲膠囊處方中的大多數有效成分。大黃蟄蟲膠囊處方由多味中藥組成，成分復雜，其有效成分的化學結構差異較大，需選擇一種合適的提取劑，才能將各種有效成分從膠囊中提取出來。本發明比較了甲醇、乙醇及不同比例的甲醇-水、乙醇-水等作為提取劑的提取效率。結果表明，高比例有機溶劑適合提取極性較小的大黃蒽醌類成分(如大黃素等)，低比例有機溶劑對苷類成分(如苦杏仁苷及芍藥苷等)有較高的提取率，但也引入了較多的強極性雜質，干擾測定。經反復試驗，確定50%乙醇作為提取劑為最佳。

（2）由于大黃蟄蟲膠囊中的指標成分化學結構不同，紫外吸收差別較大，如果在同一波長下檢測將會損失某些成分的靈敏度。因此，本發明采用可變波長檢測器，采用不同時間段選擇不同波長進行分段檢測的方法，分別在各成分的最大紫外吸收處檢測，使各化合物在相應波長下獲得最高的檢測靈敏度。