[發明專利]一種檢測豬繁殖與呼吸綜合癥病毒血清抗體的多重表位融合抗原及其制備的試劑盒

有效

• 申請號: 201210241270.2
• 申請日: 2012-07-12
• 公開（公告）號: CN102731661A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 黃洪濤;嚴俊;姚靜;石延賓;張憲;胡偉;江雨麗;李小魚;魏勇
• 申請（專利權）人: 重慶業為基生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;C12N5/10;G01N33/68
• 代理公司: 重慶志合專利事務所 50210
• 代理人: 胡榮琿

技術領域

本發明涉及一種檢測豬繁殖與呼吸綜合癥病毒血清抗體的多重表位融合抗原及其制備的試劑盒。?

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合癥(Porcine?reproductive?and?respiratory?syndrome，PRRS)，俗稱豬藍耳病，是80年代末出現的一種新的豬傳染性疾病，其病原體是豬繁殖與呼吸綜合癥病毒(Porcine?reproductive?and?respirator?syndrome?virus，PRRSV)。1987年美國首先報道了該病的發生，其癥狀主要表現為懷孕母豬發生流產、早產、死胎和木乃伊等嚴重的繁殖障礙，仔豬呼吸系統癥狀和斷奶前死亡率增高，育成豬呼吸困難，發育遲緩，公豬性欲減退精液品質下降等。1991年歐洲爆發了毀滅性流行，造成了近百萬頭豬死亡。中國于1996年由中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所首次從國內疑似豬繁殖與呼吸綜合癥病毒感染的豬場中分離到豬繁殖與呼吸綜合癥病毒，確認了本病在國內的發生和流行。2003年起許多專家都驚呼“全國豬場一片藍”，豬繁殖與呼吸綜合癥病毒的高感染率是一個不爭的事實。更為令人擔憂的是，2006年夏季，中國中南部爆發了高致病型豬繁殖與呼吸綜合癥，之后蔓延到全國各個省市。高致病型豬繁殖與呼吸綜合癥的特點是能使不同年齡和不同品種的豬都感染發病，且發病率高、病死率高、治愈率低。2007年，國內共有26個省份發生了高致病型豬繁殖與呼吸綜合癥，發病豬數量達30多萬頭，許多發病豬場的死淘率甚至達到100%。直至今日，疫病形勢依然嚴峻，高致病型豬繁殖與呼吸綜合癥病毒已經成為豬的三大致死性病原之首，嚴重地影響了國內畜牧業生產。?

由于目前還沒有有效的治療手段，所以對于豬繁殖與呼吸綜合癥，尤其是高致病型豬繁殖與呼吸綜合癥，及時、正確的診斷是預報疫情、控制流行態勢、?防止疫病爆發的首要環節。?

豬繁殖與呼吸綜合癥病毒為有囊膜的單股正鏈RNA病毒，病毒粒子直徑50～65nm，核衣殼25～35nm，表面有明顯的纖突，核衣殼呈立體對稱的二十面體。該病毒屬于套式病毒目（Nidovirales），動脈炎病毒科（Arterivirus）。豬繁殖與呼吸綜合癥病毒基因組全長約15.4kb，包括9個開放閱讀框架（Open?Reading?Frame，ORF），分別編碼病毒復制所需要的酶（ORF1a和ORF1b）和7個結構蛋白（ORF2a、ORF2b、ORF3～ORF7）。ORF1a和ORF1b占基因組全長的3/4,編碼的多聚蛋白pp1a和pp1ab最終可水解為14個非結構蛋白(Nonstructural?Protein,NSP)。這些NSP編碼病毒RNA復制酶，是病毒產生的唯一的非結構性蛋白，參與病毒復制。按照歐洲型豬繁殖與呼吸綜合癥病毒Lelystad株各非結構蛋白劃分,Nsp7的起止位置為Ser?2083～Glu?2351。北美洲型豬繁殖與呼吸綜合癥病毒VR-2332株Nsp7的起止位置為Ser?2200～Glu2458氨基酸。我國流行的豬繁殖與呼吸綜合癥病毒主要是北美洲型,主要為高致病性HuN4株，由于HuN4株較VR-2332株在Nsp2處存在30個氨基酸的缺失,所以HuN4株Nsp7的起止位置為Ser?2170～Glu?2428。Nsp7共259個氨基酸,由777個堿基編碼。研究顯示Nsp7可誘導機體產生高水平的抗體,并能維持較長時間,說明Nsp7與機體免疫應答關系密切。ORF5編碼主要的囊膜糖蛋白GP5，ORF2～ORF4分別編碼次要結構蛋白GP2a、GP2b、GP3和GP4，GP5與ORF6編碼的基質蛋白M形成二聚體，核衣殼蛋白（N蛋白）由ORF7編碼。其中，N蛋白在病毒粒子中含量較高，是病毒的優勢結構蛋白，約占病毒蛋白總量的20%～40%，同時抗原性最強且具有較好的保守性。豬繁殖與呼吸綜合癥病毒感染后機體首先產生的是針對N蛋白抗體，并且在體內持續時間最長，因而該蛋白已被作為檢測豬繁殖與呼吸綜合癥病毒血清抗體的診斷抗原。?