[發明專利]一種檢測豬繁殖與呼吸綜合癥病毒血清抗體的多重表位融合抗原及其制備的試劑盒

有效

• 申請號: 201210241270.2
• 申請日: 2012-07-12
• 公開（公告）號: CN102731661A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 黃洪濤;嚴俊;姚靜;石延賓;張憲;胡偉;江雨麗;李小魚;魏勇
• 申請（專利權）人: 重慶業為基生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;C12N5/10;G01N33/68
• 代理公司: 重慶志合專利事務所 50210
• 代理人: 胡榮琿

1.一種檢測豬繁殖與呼吸綜合癥病毒血清抗體的多重表位融合抗原，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

2.如權利要求1所述的多重表位融合抗原，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示。

3.一種重組表達載體，其特征在于，含有權利要求2所述的核苷酸序列基因片段。

4.一種宿主菌，其特征在于，具有如權利要求3所述的重組表達載體。

5.一種制備權利要求1所述的多重表位融合抗原的方法，其特征在于，包含以下步驟：

1)克隆或合成多重表位融合抗原的基因序列；

2)酶切克隆的多重表位融合抗原的基因序列，連接經酶切的表達載體，構建多重表位融合抗原的重組表達載體；

3)將重組表達載體導入宿主菌，表達多重表位融合抗原融合蛋白；

4)純化所述融合蛋白，獲得所述多重表位融合抗原。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟3）需加入IPTG誘導劑，所加入IPTG的濃度為0.3～1.0mmol/L，誘導溫度為24～37℃，誘導時間為2～6小時。

7.如權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟4）進一步包含以下步驟：

1）采用GST親和層析進行初純化；

2）采用His親和層析純化；

3）脫鹽柱處理；

4）采用Lowry法測定重組蛋白濃度；

5）采用高效液相色譜法測定重組蛋白純度。?

8.一種檢測豬繁殖與呼吸綜合癥病毒的試劑盒，其特征在于，包含權利要求1所述的多重表位融合抗原。

9.如權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，還進一步包括以下組分：抗原包被板、陰性對照和陽性對照、樣本稀釋液、沖洗緩沖液、酶標抗體工作液、底物液、終止液。?