[發明專利]一種具有保肝和抗氧化作用的大豆乳清多肽的制備方法

有效

• 申請號: 201210241261.3
• 申請日: 2012-07-12
• 公開（公告）號: CN102732591A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 王常青;樊迎
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 楊耀田

技術領域

本發明涉及大豆乳清多肽的制備，具體涉及生產豆類分離蛋白及豆制品產生的乳清廢水的深加工，更具體地說是一種具有保肝和抗氧化作用的大豆乳清多肽的制備方法。

背景技術

大豆乳清蛋白存在于加工大豆分離蛋白和豆制品過程中排放的廢水中，生產1噸的分離蛋白會排放20～30m³的乳清廢水。初步估算，每加工1噸的分離蛋白所排放的乳清廢水中含有乳清蛋白為70kg左右，因此，深入開發應用豆類乳清，對于豆類綜合利用和環境保護方面都具有積極意義。近年來已有利用大豆分離蛋白加工抗腫瘤多肽和抗疲勞大豆多肽的報道，如劉娜等在中國實驗診斷學上發表的論文《大豆寡肽抗疲勞作用的實驗研究》，戚穎欣等在食品科學雜志上發表的《大豆多肽對小鼠急性肝損傷保護作用的研究》，所用原料均為分離蛋白或多肽。目前尚未見到利用大豆類乳清水解多肽開發保肝和抗氧化食品的報道。

已有的關于酶法水解乳清蛋白制備多肽的研究，如專利CN101519426A用堿性蛋白酶水解乳清蛋白，得到具有較高生理活性的多肽片段,分子量分布在100～2800Da之間；專利CN101785521A采用蛋白酶U和蛋白酶A復合水解得到乳清水解多肽，產物抗原性低、苦味小。這些酶法水解乳清多肽的特點是，①在水解前均對乳清蛋白進行熱處理使其變性，加大能源耗費;②這些方法中酶都是一次性直接大量加入的，這樣容易破壞水解時底物與酶的平衡關系，有相當一部分酶在加入后根本沒有機會參與反應而在罐內慢慢降低酶活甚至失效（溫度、pH值及時間會使酶活部分喪失）；況且一次性投入大量的酶會造成前期反應過快，過早產生大量游離氨基酸而使得多肽得率有所降低。

發明內容

本發明的目的在于提供一種具有保肝和抗氧化作用的大豆乳清多肽的制備方法。該方法酶解時間短、能耗較低，且使得1000Da以下小分子乳清多肽得率高，游離氨基酸含量較低。

本發明提供的一種具有保肝和抗氧化作用的大豆乳清多肽的制備方法，包括以下步驟：

1）、將大豆乳清水用常規方法進行絮凝沉淀，除去沉淀物，控制上清液的乳清蛋白的含量在4～5gL，每升上清液加入0.5g～1.5g半胱氨酸，在22-40℃保溫靜置6～12h；

2）、在pH2～3、溫度40℃～55℃條件下，按每克乳清蛋白加入1000-2500活力單位（U）的酸性蛋白酶，分2～3次加入，每次加酶后水解1～2.5小時；

3）、在pH2～3、35℃～45℃條件下，按每克乳清蛋白加入1000-2500U的胃蛋白酶，分2～3次加入，每次加酶后水解1～2小時；

4）、滅酶、離心、過濾、濃縮、干燥，得到大豆乳清多肽。

所述的酸性蛋白酶可以是3.350酸性蛋白酶或537酸性蛋白酶，優選3.350酸性蛋白酶。

所述的大豆可以是黑豆、黃豆或青豆。

與現有技術相比，本發明具有如下優點和效果：

1.在本發明水解乳清蛋白之前，加入半胱氨酸處理，目的是用半胱氨酸改變乳清蛋分子內部的二硫鍵，使蛋白質容易被進一步水解；此外，利用半胱氨酸具有的還原能力和特殊的理化性質，當其與乳清蛋白結合后，會使乳清蛋白的結構和功能發生改變，從而增強抗肝損傷和抗氧化活性。試驗發現，與傳統的乳清蛋白熱處理相比，半胱氨酸處理能有效提高酶解效率，多肽得率能提高8%～17%，同時也能降低耗能，符合綠色節能的宗旨。

2.先用酸性蛋白酶進行一次水解，然后用胃蛋白酶進行二次水解，這種復合酶水解，可以得到更多的小分子小黑豆乳清多肽。與用單酶水解和其他酶的復合水解相比，1000Da以下小肽所占比例達到80%以上，且游離氨基酸含量少，抗氧化功能更強。

3.先分批加入酸性蛋白酶，然后分批加入胃蛋白酶所得的多肽與一次性加入蛋白酶水解相比，游離氨基酸含量明顯降低。

4.體外抗氧化實驗表明，該多肽具有明顯的清除羥自由基、超氧陰離子自由基和的作用，其總氧化性與Vc相近。動物喂養試驗發現，該大豆乳清多肽不但具有保肝和預防化學性肝損傷的保健作用，而且還能起到延緩皮膚衰老、恢復皮膚彈性等美容效果。經人體試食發現，該大豆乳清多肽口感好，沒有任何副作用。本發明制備的大豆乳清多肽既可以用于功能性食品和化妝品，也可以用于一般食品。

附圖說明

圖1小鼠肝組織切片H.E染色圖，其中：A基礎組，B模型組，C多肽組

具體實施方式

實施例1