[發明專利]一種抗CD3/抗CD133雙特異性抗體及該雙抗裝載的CIK細胞

無效

• 申請號: 201210238527.9
• 申請日: 2012-07-10
• 公開（公告）號: CN102775494A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發明（設計）人: 黃建華
• 申請（專利權）人: 黃建華
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;C07K16/30;C07K16/28;C12N5/0783
• 代理公司: 北京元中知識產權代理有限責任公司 11223
• 代理人: 王明霞

1.一種抗CD3/抗CD133雙特異性抗體，其特征在于，所述的雙特異性抗體含有抗CD3的單克隆抗體和抗CD133的單克隆抗體。

2.根據權利要求1所述的抗CD3/抗CD133雙特異性抗體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將抗CD3的單克隆抗體1mg溶解于Traut′s試劑，15～25℃下作用1～2小時；用PD-10柱過濾，除去未交聯的單克隆抗體；

（2）CD133/1單克隆抗體1mg溶于交聯劑Sulfo-SMCC，15～25℃下作用1～2小時；用PD-10柱過濾，除去未交聯的單克隆抗體；

（3）將步驟（1）步驟（2）得到的交聯后的單克隆抗體混合，1～4℃下作用12～18小時。

3.一種權利要求1所述的抗CD3/抗CD133雙特異性抗體裝載的CIK細胞。

4.根據權利要求3所述的融合抗CD3/抗CD133雙特異性抗體的CIK細胞的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）CIK細胞的培養：

取健康外周靜脈血10ml，肝素抗凝，用生理鹽水1：1稀釋后，加至淋巴細胞分離液上層，離心收集單個核細胞，用含5%胎牛血清的RPMI1640培養液調整細胞密度為2×10⁶個/ml，置于37℃，5％CO₂培養箱中培養12～24h，然后加入rhIL-1α?100U/ml、鼠抗人CD3?McAb?50ng/ml，rhIL-2?1000U/ml，每兩天添加rhIL-2?1000U/ml，在培養第14天，檢查CD3、CD4、CD8和CD56，收獲CIK細胞；

（2）CIK細胞表型的檢測：

調整培養0天和14天的CIK細胞濃度為5×10⁶個/ml，各取200μl加入離心管中，加入鼠抗人CD3-Percp、CD4-FITC、CD8-PE、CD56-APC四標抗體及同型對照IgG1單抗各5μl，混勻，在4℃暗室反應20～40min后，PBS洗滌1～3次，流式細胞儀檢測CIK細胞中CD3陽性細胞≥85%，CD3和CD8雙陽性細胞≥60%，CD3和CD56雙陽性細胞≥20%；

（3）抗CD3/抗CD133雙特異性抗體裝備CIK細胞：

離心收集培養14天并經表型檢測的CIK細胞，PBS洗滌1～3次，按1×10⁶CIK/50ng雙抗濃度加入抗CD3/抗CD133雙特異性抗體，混勻后室溫靜置40～80分鐘，PBS洗滌1～3次。?