[發明專利]一種人鼻咽癌腫瘤干細胞系建立方法

有效

• 申請號: 201210238190.1
• 申請日: 2012-07-10
• 公開（公告）號: CN102732484A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 周克元;李濤;李彩虹;冀天星;黃穎;林碧華;張鑫
• 申請（專利權）人: 廣東醫學院
• 主分類號: C12N5/095
• 分類號: C12N5/095
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 羅曉林;李志強

技術領域

本發明涉及生物及醫學領域，具體地，本發明涉及一種人鼻咽癌腫瘤干細胞系建立方法。?

背景技術

鼻咽癌（nasopharyngeal?carcinoma,?NPC）是指鼻咽腔表面的上皮或鼻咽隱窩上皮發生的上皮性惡性腫瘤。鼻咽癌發病具有地方性特點，我國是世界上鼻咽癌發病率最高的國家，而華南地區，尤其是廣東及其臨近地區如廣西、香港等地是高發病區，發病率比其它大部分國家地區高100倍以上，因此也有“廣東瘤”之稱。目前鼻咽癌的發病機理尚不明確，有待進一步深入研究。?

干細胞（stem?cell）是存在于動物和人的一種特殊功能細胞，具有多種分化能力和自我更新能力。干細胞生物學特性包括：(1)全能性或多功能性，干細胞具有分化為多種類型細胞的潛能；(2)自我更新能力，干細胞一旦形成，在機體終生都具有自我更新能力，通過不均一分裂進行自我更新和產生分化祖細胞，維持機體組織器官的穩定性；(3)高度增殖能力，對于維持機體正常功能有著重要的作用。?

腫瘤干細胞(tumor?stem?cells,TSC)，也稱為癌干細胞，為一種特殊類型的干細胞，TSC因為在各種致瘤因素的作用下，在基因水平失去對其生長的正常調控，而表現出無限增殖、轉移、異質性等特點。腫瘤干細胞與干細胞有很多相似的特征：(1)都具有無限增殖和分化的特點；(2)存在相似的調節自我更新的信號傳導途徑；(3)都具有不同表型，異質性；(4)都具有端粒酶活性，都能轉移到各種不同的組織且有相似的歸巢和轉移途徑。當然，TSC還具有不同于干細胞的特點：(1)自我更新信號轉導途徑的負反饋機制已被破壞；(2)缺乏分化成熟能力；(3)傾向于累積復制的錯誤，而干細胞能夠防止復制錯誤的發展等。?

從腫瘤干細胞角度入手，對于鼻咽癌發病機理，診斷治療方案等都可帶來積極的推動作用。而目前對于鼻咽癌腫瘤干細胞系的建立及相關理論研究并不多見。?

發明內容

針對目前鼻咽癌發病率高的問題，本發明提供一種建立人鼻咽癌腫瘤干細胞系的方法，以對鼻咽癌的診斷治療起到推動和促進作用。?

本發明的目的通過以下技術手段得以實現：?

一種人鼻咽癌腫瘤干細胞系的建立方法，包括以下步驟：

（1）?獲得單細胞狀態的人鼻咽癌細胞；

（2）?將步驟（1）得到的單細胞狀態的人鼻咽癌細胞加入含表皮生長因子和堿性成纖維細胞生長因子的無血清干細胞培養基中，得單細胞懸液；

（3）?將步驟（2）中的單細胞懸液濃度調整至900～1100/ml；

（4）?將步驟（3）得到的單細胞懸液接種于細胞培養板中，再加入等體積干細胞培養基進行培養72～96h；?

（5）?收集步驟（4）所得細胞，胰酶消化至單個細胞并進行傳代培養。

本發明提供的鼻咽癌干細胞系建立方法，操作簡便，得到的鼻咽干癌細胞系具有較強的克隆形成能力，具有較強的藥物耐受性，較高的干性因子表達量，且對裸鼠有較強的致瘤能力，可用于鼻咽癌干細胞的發病機理和診斷治療方面的研究。?

附圖說明

圖1為本發明實施例中使用不同鼻咽癌細胞CNE-2、SUNE-1、HONE-1得到的球形成率；?

圖2顯示了本發明實施例中使用的鼻咽癌細胞CNE-2與CNE-2s的細胞形態；

圖3為本發明實施例中鼻咽癌細胞CNE-2與CNE-2s的克隆形成率比較；

圖4為本發明實施例中鼻咽癌細胞CNE-2與CNE-2s對吉西他濱的耐受性比較；

圖5為本發明實施例中鼻咽癌細胞CNE-2與CNE-2s表達干性因子的RT-PCR檢測結果，其中柱狀圖中左側為CNE-2，右側為CNE-2s；

圖6為本發明實施例中鼻咽癌細胞CNE-2與CNE-2s對于裸鼠致瘤能力的比較。

具體實施方式

以下將結合附圖通過具體實施例對本發明進行詳述，應理解此處所述實施例僅出于解釋本發明的目的而非對其進行限制。?

本發明提供一種人鼻咽癌腫瘤干細胞系的建立方法，包括以下步驟：?

（1）?獲得單細胞狀態的人鼻咽癌細胞；

（2）?將步驟（1）得到的單細胞狀態的人鼻咽癌細胞加入含表皮生長因子和堿性成纖維細胞生長因子的無血清干細胞培養基中，得單細胞懸液；

（3）?將步驟（2）中的單細胞懸液濃度調整至900～1100/ml；

（4）?將步驟（3）得到的單細胞懸液接種于細胞培養板中，再加入等體積干細胞培養基進行培養72～96h；?